hsa-mir-365a对乳腺癌细胞mcf-7抑制作用及其机制

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1、学位论文独创性声明ⅢIJllllIJIIJJIflllIMIllllJJJlllllflllllllfJY2402401本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得直昌太堂或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名(手写)：千Ⅵ水签字日期：扩1>年6月∑日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解南昌大学有

2、关保留、使用学位论文的规定，有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权南昌大学可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编本学位论文。同时授权中国科学技术信息研究所和中国学术期刊(光盘版)电子杂志社将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》和《中国优秀博硕士学位论文全文数据库》中全文发表，并通过网络向社会公众提供信息服务。(保密的学位论文在解密后适用本授权书)、．．学位论文作者签名(手写)：氐琳导师签名(手写)：彳l拗‘弋oJ签字日期：]

3、!d；年6月y日签字日期：护I弓年6月∑。日摘要立项依据：MicroRNA(miRNA)通过与靶基因mRNA的3’非翻译区(3’t3TR)特异性结合诱导靶基因mRNA的降解或阻遏其翻译。c．Myc作为一种重要的癌症相关转录因子在调节细胞生长、分化、恶性转化和凋亡等过程中起重要作用。近期的研究表明，c．Myc也可通过调节miRNA的表达而参与肿瘤的发生发展过程。我们利用生物信息学方法从已知的实验数据中，预测到大量miRNA受c．Myc调控，其中受c．Myc直接调控的110个miRNA位于基因的内含子和107个miRNA位于基因之间。根据

4、我们设定的筛选条件如miRNA表达水平较高(reads数大于4)、具有c．Myc的结合位点(motif>0)、TSS即E．box与miRNA结合位点距离较近(5kb以内)以及FDR值即转录因子对基因的调控强度较大(小于O．05)等，共选出5个位于基因内的miRNA和16个位于基因间的miRNA。最后经过Q．PCR验证以及miRNA的可能作用靶点分析，确定has．miR．365a作为实验对象，并系统探讨其对乳腺癌细胞MCF．7生长的作用及其分子机制。实验结果：1．c．Myc特异性siRNA可明显抑制乳腺癌细胞MCF．7的c．Myc表达，

5、其抑制mRNA表达的强度达80％以上，对蛋白也有明显的抑制作用。血清依赖性细胞生长实验和饱和密度实验结果都表明，c．Myc特异性siRNA介导的c．Myc表达抑制可使MCF．7的增殖明显减缓。同时，实验结果还显示，抑制MCF．7的c．Myc表达可显著升高细胞内has．miR．365a水平。2．我们在血清依赖性细胞生长和饱和密度实验，以及活细胞检测等观测到，Has．miR．365a模拟物(mimic)可明显抑制MCF．7的恶性增殖，而其抑制剂(inhibitor)则可几乎完全取消has．miR．365a的作用。3．Has．miR．365

6、a模拟物(mimic)和抑制物(inhibitor)可分别显著抑制和取消has．mir-365a的靶基因HSPA8(编码蛋白是Hsc70)的表达，luciferase报告基因实验也证明，has．mir一365a(模拟物)可特异性地作用于HSPA8的YUTR区域，进而抑制靶基因的翻译。摘要讨论与结论：c．Myc通过miRNA调节途径而参与肿瘤的发生发展过程已引起人们的高度关注。HSPA8是热休克蛋白70(HSP70)家族一员，编码73kDa的热休克同源蛋白Hsc70，后者在促进蛋白折叠及维持其正常的结构和功能中都扮演着重要的角色。以往的

7、工作表明，Hsc70无论是正常状态或是应激状态下对维持蛋白的动态平衡——如转运、组装、降解等过程中起关键作用。我们的实验结果表明，c．Myc调控的has．mir．365a对乳腺癌细胞MCF．7的生长具有重要的调节作用。同时我们的结果还证明，has．mir．365a对MCF．7细胞的抑制作用是通过调节其靶基因HSPA8(Hsc70)而实现的。因此，我们得出结论：c．Myc调控的has．mir．365a-Hsc70途径在乳腺癌的发生发展过程中起重要作用。关键词：c—Myc、miR．365a．3p、MCF．7、Hsc70AbstractBa

8、ckgroundABSTRACTmicroRNA(miRNA)wasfoundtoinducethemRNAdegredationandtranslationalrepressionbyspecificbindingto