骨桥蛋白异构体在胃癌中生物学作用及其分子机制地研究

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1、上海交通大学博士学位论文论文题目：骨桥蛋白异构体在胃癌中的生物学作用及其分子机制研究学号：指导教师：0097209123菱匾蒸副教授学科(专业)：处科堂f普通处科l论文提交日期：2012年4月骨桥蛋白异构体在胃癌中的生物学作用及其分子机制研究oSTEoPoNTINSPLICEVARIANTSBIoLOGICALFUNCTIONSANDMoLECULARMECHANISMINGASTRICCANCER学号：指导教师：导师组成员：学科(专业)：申请学位级别：培养单位：论文提交日期：基金项目：本课题受国家自然科学基金(81072012，81172324)；国家86

2、3重大项目(2006AA02A301，2007AA022179)；上海市科委基金(10jcl41100，09DZl950100，09DZ2260200，11jcl407602，10140904200)；国家“十一五”科技支撑计划(2008BAl52803，2011BA203191)资助丝授授授授麴型蝗U她煎夔夔蓝副一塑￡一醚型一一一一一一幽一捌一上海交通大学学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出

3、重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：日期：加p年厂月lEt上海交通大学学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查N,禾il借阅。本人授权上海交通大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。保密口，在一年解密后适用本授权书。本学位论文属于不保密函。(请在以上方框内打“妒)学位论文作者签名：日期：2夕f1年厂月f日

4、连指导教师签名：日∥【X甲月1日上海交通大学医学院博士学位论文骨桥蛋白异构体在胃癌中的生物学作用及其分子机制研究摘要目的：本课题组前期研究显示骨桥蛋白(OPN)在胃癌中高表达，且与较差的预后相关。OPN功能广泛，而mRNA前体经选择性剪切后拼接则是其重要的调控方式，不同的外显子拼接后可以形成OPN—a、OPN-b与OPN-c三种形式异构体。本课题旨在通过研究骨桥蛋白三种异构体在胃癌ffl的表达、生物学作用和分子机制，阐明OPN异构体在胃癌发生发展中的意义，为临床上指导诊断与治疗提供依据。方j法：通过定量PCR，对101例胃癌患者肿瘤组织、9株胃癌细胞与l株永

5、生化胃粘膜细胞中的OPN三种异构体表达情况进行检测，然后收集101例胃癌患者临床病理特征参数并结合OPN异构体的表达分析相关性。同时运用胃癌中高表达的EGF、HGF、IGF—I与PDGF生长因子刺激胃癌微环境中的癌细胞和癌相关成纤维细胞，观察OPN三种异构体的表达变化。选择表达内源性OPN异构体较低的MKN45与SGC7901细胞，分别构建稳定过表达OPN三种异构体的胃癌细胞株和稳定表达空载质粒的对照细胞株，然后进行细胞增殖、克隆形成、抗凋亡、转移与侵袭等一系列体外实验，观察胃癌细胞中OPN异构体各白发挥的生物学功能。进一步选择体内实验进行裸鼠皮下成瘤与尾静

6、脉转移成瘤实验，观察在体内OPN异构体对胃癌生长和转移的影响。对胃癌细胞过表达OPN异构体后下游凋亡相关蛋白、受体分子CD44v5"---'v7、侵袭转移相关分子MMP2和uPa、趋化因子CCL5与IL8等改变情况进行检测，从而深入探讨OPN异构体影响胃癌细胞抗凋亡能力与促胃癌细胞转移能力的机制。结果：OPN三种异构体在胃癌组织中均表达升高，其中OPN-b升高幅度最大。OPN-b高表达与胃癌原发灶的大小、侵袭深度和TNM分期相关，OPN—C高表达则与胃癌侵袭深度、淋巴结转移和TNM分期相关。此外，OPN—b是胃癌细胞中最主要表达的OPN异构体，而OPN-c在

7、胃癌细胞中的表达高于其在永生化胃粘膜细胞中的表达。当以生长因子EGF、HGF、IGF—I与PDGF刺激后，胃癌细胞内OPN—b表达升高最明显，而胃癌相关成纤维细胞内OPN-c表达升高最明显。I：海交通大学医学院博士学位论文胃癌细胞过表达OPN异构体后，OPN-a、OPN-b与OPN-c均具有促进增殖、克隆形成和体内成瘤能力，其中以OPN-b能力最强，OPN-a能力最弱。OPN—b和OPN—C均能协助胃癌细胞抗过氧化氢刺激后的凋亡，且OPN—b能力更强。OPN—b与OPN—C的抗凋亡能力主要通过上调CD44异构体受体CD44v5’v7，从而促进OPN与CD44

8、v受体结合并启动CD44v相关的细胞存活通路，达到调