癌基因k-ras在人胃癌中的作用及其分子机制的研究

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1、分类号——UDC密级编号十-初大学CENTRAI。SoUTHUNIVERSITY硕士学位论文论文题目学科专业研究生姓名导师姓名及职称中南大学2012年5月原创性声明本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。作者签名：一=马虹日期：巡一年羔月丑日学位论文版权使用授权书本人了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定，

2、即：学校有权保留学位论文并根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部分内容，可以采用复印、缩印或其它手段保存学位论文。同时授权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》，并通过网络向社会公众提供信息服务。储繇土牛翩签名茸竺啸业年善月卫日硕士学位论文中文摘要摘要胃癌是最常见、死亡率最高的恶性肿瘤之一，中国胃癌发病率较高，严重危害中国人健康。目前胃癌的病因、发展机制还不十分清楚。因此，探讨胃癌的病因、发病机制和寻找新的治疗靶点具有重要的意义，并可为发展新的治疗策略提供理论依据。Ras

3、癌基因参与人类肿瘤的发生发展，其中，K-Ras贝JJ对人类癌症影响最大，K-Ras蛋白在肿瘤的发生、发展起着关键作用，其通过下游信号蛋白参与细胞周期调控，与肿瘤细胞的生存、增殖、迁移扩散、血管生成密切相关。野生型的K．Ras蛋白由上游EGFR活化而导致短暂激活，其后迅速失活。K．Ras激活／失活效应是受控的。突变型蛋白导致蛋白功能异常，在无EGFR活化信号刺激下处于激活状态，其功能状态不可控，导致肿瘤的持续增殖。目前k-ras突变后导致肿瘤细胞恶变的分子病理机制还不太清楚，有待于进一步研究。目的：检测k．ras在胃癌中突变，探讨k-ras突变在胃癌发生、发展

4、和侵袭、转移过程中的作用和机制，寻找胃癌基因治疗新靶点。方法：1．以胃癌基因组DNA为模板，通过聚合酶链反应(PCR)，扩增k-ras基因1、2外显子，运用基因测序技术检测k-ras在不同胃癌细胞系中的突变。2．通过细菌转化、质粒提取、酶切、凝胶电泳、基因测序鉴定等方法鉴定k-ras质粒(突变和野生型)和阴性对照质粒(pQCXIH)，并转染具有侵袭能力的人胃癌细胞系SGC7901细胞，采用Westernblotting、RT．PCR检测k-ras突变组、野生组、阴性对照组及未转染组细胞中k．ras的表达，以证实质粒转染效果。3．k．ras质粒(突变和野生型)

5、和阴性对照质粒转染人胃癌细胞系SGC7901、MKN45细胞，运用Westernblotting、RT．PCR方法检测Fascinl的表达。4．k-ras质粒(突变和野生型)和阴性对照质粒转染人胃癌细胞系SGC7901、MKN45细胞，运用Westernblotting、RT．PCR方法检测Snail、Slug的表达变化。5．k-rasshRNA和阴性对照质粒转染BGC823细胞，运用Westernblotting、RT．PCR方法检测Fascinl、Snail、Slug的表达变化。硕士学位论文中文摘要6．k．ras质粒(突变和野生型)和阴性对照质粒转染人胃

6、癌细胞系SGC7901、MKN45细胞，运用Transwell技术检测细胞的侵袭和转移能力。7．k．rasshRNA和阴性对照质粒转染BGC823细胞，运用Transwell技术检测的细胞的侵袭和转移能力。结果：1．癌基因k．ras第12、13、61密码子在胃癌细胞系SGC7901、MKN45、MKN28、BGC823、HGC．27中未见突变，胃癌细胞系AGS第12密码子出现突变。2．k．ras突变促进胃癌细胞迁移和侵袭能力。3．k．ras转染SGC7901、MKN45细胞后，突变过表达组与野生过表达组、阴性对照组、正常组相比，Fascinl表达几乎无变化；

7、snail、slug表达明显增加。4．k-rasshRNA抑制胃癌细胞迁移、侵袭能力。5．和BGC823细胞比较，k．rasshRNA抑制组，Fascinl表达几乎无变化；snail、slug表达明显下调。结论：1．部分胃癌细胞系中可见k-ras突变；2．k-ras突变促进胃癌的发展和侵袭转移；3．k-ras通过调控snail、slug的表达介导胃癌的侵袭和转移；4．k．ras与Fascinl未见相关性。关键词：k．ras，胃癌，突变，RNA干扰，侵袭，转移II硕士学位论文英文摘要ABSTRACTGastriccancerisoneofthemostcomm

8、onmalignancieswithhighmort