il-1β对骨髓间充质干细胞粘附分子表达影响及对骨髓间充质干细胞向心肌梗死区归巢作用

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1、目录一、英文缩略词表…………………………………………………………2二、摘要……………………………………………………………………3中文摘要……………………………………………………………3英文摘要……………………………………………………………5三、正文…………………………………………………………………8前言…………………………………………………………………8材料与方法…………………………………………………………10结果…………………………………………………………………16讨论…………………………………………………………………21结论………………………………………………………

2、…………25参考文献……………………………………………………………26四、附录………………………………………………………………30五、致谢…………………………………………………………………31六、综述………………………………………………………………32正文………………………………………………………………32参考文献…………………………………………………………371英文缩略词表英文缩写英文全名中文名称BMMSCsBoneMarrowMesenchymicalstemcells骨髓间充质干细胞SDSprague-Dawley史－道二氏大鼠DMEMDulbeccomodifi

3、edEaglemediumDulbecco改进的Ea养基FBSFetalbovineserum胎牛血清HGFHepatocytegrowthfactor肝细胞生长因子IL-1βInterleukin-1β白介素-1βBrdu5-bromodeoxyruidine5-溴脱氧尿核苷AMIAcutemyocardialinfarction急性心肌梗死SDF-1StromalCell-DerivedFactor-1基质细胞衍生因子-1VLA-4Verylateactivationantigen迟反应性抗原VCAM-1Vascularcelladhesionmolecule-1血

4、管细胞粘附分子-1ICAM-1Intercellularadhesionmolecule-1细胞间粘附分子-12IL-1β对骨髓间充质干细胞粘附分子表达的影响及对骨髓间充质干细胞向心肌梗死区归巢的作用中文摘要研究背景Friendenstein等研究发现在塑料培养皿中培养的贴壁的骨髓单个核细胞在一定条件下可以分化为脂肪细胞、成肌细胞、成骨细胞以及成软骨细胞，而且这些细胞甚至经过20～30代传代培养后仍保持其多向分化潜能。骨髓中的这种多能干细胞因能分化为多种中胚层来源的间质细胞而被称为骨髓间充质干细胞（bonemarrowmesenchymalstemcells，BMMSC

5、s）。BMMSCs因其具有多向分化潜能，低免疫原性和易于体外扩增等特点，而成为组织工程中理想的种子细胞。目前，研究较多的运用BMMSCs移植治疗心肌梗死有两种方式：血管输入法和损伤组织直接注射法。其中，经局部血管输入法是目前最常用的方法。经局部血管输入的BMMSCs首先需跨越血管内皮细胞和细胞外基质进入骨髓龛位，在各种体内因子作用下实现了归巢，才能在各种因素的作用下进行定向分化，发挥作用。根据相关研究，推测在这一过程中，粘附分子可能起很大作用。本文拟通过研究IL-1β对大鼠BMMSCs粘附分子表达的影响及对BMMSCs归巢作用，寻找促进BMMSCs向心肌梗死区归巢的有效

6、方法，希望对以后的临床应用提供帮助。目的研究生理条件下黏附分子ICAM-1、VCAM-1在骨髓间充质干细胞的表达及经炎症因子IL-1β刺激后BMMSCs表面黏附分子表达变化，探讨炎症因子IL-1β刺激BMMSCs粘附分子VCAM-1的有效表达、促进移植的BMMSCs向心肌梗死区归巢的可行性。3方法①BMMSCs分离、培养及鉴定：采用贴壁法结合消化控制法体外培养BMMSCs，流式细胞仪检测细胞表面抗原的表达。②体外培养至第3代的BMMSCs用于以下实验：a.将培养的BMMSCs用浓度为10μg/L的IL-1β刺激24h，采用流式细胞术检测血管细胞黏附分子-1(VCAM-1

7、)、细胞间黏附分子-l(ICAM-1)的表达率；b.开胸结扎雄性SD大鼠左冠状动脉前降支，于心肌梗死后24h，经尾静脉输注经Brdu标记、10μg/LIL-1β预刺激的BMMSCs；输注BMMSCs24h后取心肌组织，做冰冻切片，荧光显微镜下计数组织中的BMMSCs数目。以上实验以设不加IL-1β刺激作空白对照组，另在刺激组加抗VCAM-1单克隆抗体作为实验对照。结果①原代细胞接种24h后可见少量贴壁细胞，首次换夜后可见散的贴壁细胞，呈短梭形、椭圆形、三角形等形态，换夜传代后，细胞形态趋于一致，呈长梭形，细胞呈集落式生长，集落外观呈“漩涡