xage-1b腺病毒干扰载体的构建及其功能地地研究与一种fiber缺失型重组腺病毒系统的构建

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1、XAGE．ib腺病毒干扰载体的构建及其功能研究与一种fiber缺失型重组腺病毒系统的构建摘要IUlII1111IIIIIIIIIIIIII＼1965101XAGE是通过生物信息学方法发现的新一类肿瘤．睾丸抗原(cancer／testisantigen，CT抗原)基因，其主要表达亚型为XAGE．1b，其功能及表达调控机制的研究刚刚起步，已有的研究表明该基因可能与肿瘤细胞的生长和转移相关．在本研究的第一部分中，构建了针对XAGE．1b进行RNA干扰的重组腺病毒载体Adv．Shl和Adv．Sh2．半定量和定量RT-PCR显示Adv．Shl比Adv—Sh2对XAGE．1b

2、的干扰效率更高，细胞荧光干扰实验显示Adv．Shl对XAGE．1b有显著的干扰作用．在细胞增殖和集落形成实验中，感染Adv—Shl后的细胞增殖能力显著降低(P

3、载体的应用．敲除腺病毒基因组中的fiber基因，替换为改造过的fiber基因是实现腺病毒靶向性的思路之一．在本研究的第二部分中，按照上述策略建立了一套新型的腺病毒靶向基因治疗系统．基于AdEasy腺病毒系统构建了敲除fiber基因的腺病毒载体，同时构建了稳定表达Ad5fiber基因的HEK293细胞系作为该病毒载体的包装细胞系．结果表明该套系统产生的缺陷型病毒能够在该细胞系中完成包装并扩增，具有正常病毒的感染能力．该系统为进一步构建靶向腺病毒基因治疗系统打下了基础．关键词：肿瘤一睾丸抗原(CT抗原)；XAGE—lb；腺病毒；RNA干扰：靶向中图分类号：Q78&R7

4、3XAGE-Ib腺病毒干扰载体的构建及其功能研究与一种fiber缺失型重组腺病毒系统的构建AbstractXAGEdiscoveredbybioinformatics，isanewtypeofcancer／testisantigen(CTantigen)，whosemainexpressingsubtypeisXAGE—lbanditsfunctionandexpressingregulationremainsunknown．Inthefirstpartofthiswork，weconstructedtworecombinantadenovirusstrainse

5、xpressingsmallinterferingRNAagainstXAGE-lb，namedAdv—ShlandAdv—Sh2．Compared诵tllcontrolcells，semi—quantitativeandquantitativeRT-PCRshowedahigherinterferingefficiencyofAdv-ShlthanAdv—Sh2．Cellfluorescenceinterferenceassayshowedaremarkableefficiencyofdown—regulationagainsttargetgene．Compar

6、edwithcontrolcells，cellsinfectedwithAdv-Shlshowedhighermultiplicationratebycellmultiplicationassay(P

7、rcells，suggestinganimportantroleofXAGE-lbintumorgrowthandmetastasis．ThesefindingsaresignificantforfurtherstudyonXAGE-Ib’Sfunctionandroleintumorigenesis．Adenoviruscouldnotinfectacertainkindofcelllinespeciallywithoutinfectingothers，thisismainlybecauseofthewidespreadpresenceofthereceptor

8、sofad