独一味颗粒的微生物限度检查法的研究

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1、独一味颗粒的微生物限度检查法的研究崔岩(辽宁省朝阳市药品检验检测所辽宁朝阳122000)【摘要】建立独一味颗粒的微牛物限度方法。按《中国药典》2010年版微牛物限度检查法进行验证和试验。经方法学验证试验得出的检查方法可用于独一味颗粒的微牛物限度检查。【关键词】独一味颗粒；微生物限度检查；方法学验证【中图分类号】R927.2【文献标识码】A【文章编号】2095-1752(2015)21-0353-02TheValidationofMicrobiologicalTestforDuYiWeikeliCuiYan(DrugControIInstituteofChaoyangCity

2、inLiaoningProvinee,122000[Abatrct]ThemethodofmicrobiallimittestforDuYiWeikeliwasestablished.AccordingtothemethodofmicrobiallimitonEdition,2010ofChinesePharmacopoeia.ThevalidationtestresultsshowedthatthemethodcouldbeusedformicrobiallimittestforDuYiWeikeli【Keywords]DuYiWeikeli;Microbiallimit

3、test;Validationtest中药口服制剂容易受到微牛物的污染，因此微牛物限度检查是《中国药典》2010年版一部中药丸剂必检项目，是微牛物污染状况控制的重要指标。当建立的微牛物限度检查法时，应进行方法学验证，以确定所采用的方法是否适合该产品，使检验结果更具有有效性。因此木文通过对辽宁朝阳龙城制药厂提供的独一味颗粒不同批次进行了微牛物限度检查法的验证，从而确定了该品种的微牛物限度检查法。1•仪器与材料"仪器牛物安全柜(BHCJ300IIA2),生化培养箱(SHPJ50),隔水培养箱(JC303-3B)o1.2培养基和稀释液营养肉汤培养基、营养琼脂培养基、改良马丁培养基

4、、玫瑰红钠琼脂培养基、胆盐乳糖培养基、4■甲基伞形酮葡糖昔酸培养基(MUG)o稀释液：pH7.0无菌氯化钠■蛋白腺缓冲液，按要求配制，灭菌。1.3菌种大肠埃希菌(Escherichiacoli)[CMCC(B)44102]、金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)[CMCC(B)26003]枯草芽抱杆菌(Baillussubtilis)[CMCC(B)63501]>白色念珠菌(Candidaalbicans)[CMCC(F)98001]和黑曲霉(Aspergillusniger)[CMCC(F)98003]均由中国药品生物制品检定所提供。2方法2.1菌液制

5、备菌液制备：接种人肠埃希菌、金色葡萄球菌、枯草芽孑包杆菌的新鲜培养物至营养琼脂培养基中，30〜35°C培养18〜24小时；接种白色念珠菌的新鲜培养物至改良马丁培养基中，23〜28°C培养24〜48小时。上述培养物用0.9%无菌氯化钠溶液制成每lml含菌数50〜lOOcfu的菌悬液。接种黑曲霉的新鲜培养物至改良马丁琼脂斜面培养基上，23〜28°C培养5〜7天，加入3〜5ml含0.05%(ml/ml)聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液，将抱子洗脫。然后，用适宜方法吸岀孑包子悬液至无菌试管中，用含0.05%(ml/ml)聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液制成每lml含孑包子数

6、50〜lOOcfu的抱子悬液。菌悬液制备后，若在室温下放置应在2h内使用，若保存在2〜8°C的菌悬液可以在24小时内使用。黑曲霉菌的抱子悬液保存在2〜8°C,可在存储期内替代对应量的新鲜泡子悬液使用。2.2供试液制备：取加pH7.0无菌氯化钠■蛋白腺缓冲液100ml,振摇，制成1:10的供试液。取1:10的供试液:Lml,加入PH7.0无菌氯化钠■蛋白腺缓冲液9ml,即为1:100的供试夜；取1:100的供试液lml,加入pH7.0无菌氯化钠■蛋白月东缓冲液9ml,即为1:1000的供试夜。2.3细菌、霉菌和酵母菌计数的验证实验2.3.1常规平皿法供试液制备：依据《中国药典

7、》2010年版一部附录“微生物限度检查法”中供试液制备法：取本品10已加pH7.0无菌氯化钠■蛋白腺缓冲液至100ml,作为1:10的供试液。(1)试验组分别取1:10供试液lml和50〜lOOcfu试验菌，注入平皿中，立即倾注琼脂培养基，每株试验菌平行制备2个平皿，按平皿法测定其菌数。(2)菌液组：取lml±述制备的菌液，加入相应的培养基培养，测定所加的试验菌数(3)供试品对照组：分别取1:10供试液lml,按平皿法测定其菌数。(4)稀释剂对照组：取稀释液lml和50〜lOOcfu试验菌，分别注入平皿中，按平皿法