微生物限度检查法

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1、微生物限度检查法信息来源：中国药典2000年版二部附录　更新时间：2006-12-100:26:42标题微生物限度检查法附录序号附录ⅩⅢ内容全文　　C.微生物限度检查法　　微生物限度检查法系指非规定灭菌制剂及其原、辅料受到微生物污染程度的一种检查方法。包括染菌量及控制菌的检查。　　供试品应随机抽样。如遇有异常或可疑的样品，须选取有疑义的样品。一般抽样量为检验用量（2个以上最小包装单位）的3倍量。供试品在检验前不得开启，在检查前及检查中应防止供试品污染菌受损、致死或繁殖。凡能从药品、瓶口（外盖内侧及瓶口周围）外观看出发霉、变质的药品，可直接判为

2、不合格，无需再抽样检查。　　检查的全部过程均应严格遵守无菌操作，严防再污染。　　除另有规定外，本检查法中细菌培养温度为30～35℃，霉菌、酵母菌培养温度为25℃～28℃，控制菌培养温度为36±1℃。　　细菌、霉菌（酵母菌）计数和控制菌检查，均应作对照试验。　　检验结果的报告以1g、1ml或10cm<2>为单位。　　培养基及其制备方法：　　1、营养琼脂培养基与营养肉汤培养基　　见无菌检查法（附录ⅩⅢＢ）　　2、虎红琼脂培养基　　胨　　5g　　虎红（四氯四碘荧光素）　　0.0133g　　葡萄糖　　10g　　（或0.133％虎红溶液10ml）　　磷

3、酸二氢钾(KH2PO4)　　1g　　琼脂　　15～20g　　硫酸镁(MgSO4.7H2O)　　0.5g　　水　　1000ml　　除葡萄糖、虎红外，取上述成分，混合，加热溶化后，滤过，加入葡萄糖、虎红，分装，115℃灭菌30分钟。　　3、酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基(YPD)　　胨　　10g　　琼脂　　15～20g　　酵母浸出粉　　5g　　水　　1000ml　　葡萄糖　　20g　　除葡萄糖外，取上述成分，混合，加热融化后，滤过，加入葡萄糖，分装，115℃灭菌15分钟。　　4、胆盐乳糖培养基(BL)　　胨　　20g　　牛胆盐　　1.3g　　乳糖　

4、　5g　　（或去氧胆酸钠0.25g）　　氯化钠　　5g　　水　　100ml　　磷酸氢二钾(K2HPO4)　　4.0g　　磷酸二氢钾(KH2PO4)　　1.3g　　除乳糖、牛胆盐外，取上述成分,混合,加热使溶解,调节pH值使灭菌后为7.4±0.2,煮沸，滤清，加入乳糖、牛胆盐，分装，115℃灭菌30分钟。　　5、曙红美亚甲蓝琼脂培养基(EMB)　　营养琼脂培养基　　100ml　　2％曙红溶液　　2ml　　20％乳糖溶液　　　　5ml　　0.5％亚甲蓝溶液　　1.3～1.6ml　　取营养琼脂培养基，加热融化后，冷至60℃,按无菌操作加入灭菌的其它

5、三种溶液,摇匀，倾注平皿。　　6、麦康凯琼脂培养基(MaCC)　　胨　　20g　　1％中性红溶液　　2.5ml　　乳糖　　10g　　琼脂　　15～20g　　牛胆盐　　5g　　水　　1000ml　　氯化钠　　5g　　除乳糖、1％中性红溶液、牛胆盐及琼脂外、取上述成分,混合，加热使溶解，调节pH值使灭菌后为7.2±0.2，加入琼脂，加热融化后，再加入其余各成分，摇匀，分装，115℃灭菌30分钟，冷至约60℃，倾注平皿。　　7、三糖铁琼脂培养基(TSI)　　胨　　20g　　硫酸亚铁　　0.2g　　牛肉浸出粉　　5g　　硫代硫酸钠　　0.2g　　乳糖

6、　　10g　　0.2％酚红溶液　　12.5ml　　蔗糖　　10g　　琼脂　　12～15g　　葡萄糖　　1g　　水　　1000ml　　氯化钠　　5g　　除三糖、0.2％酚红溶液、琼脂外，取上述成分，混合，加热使溶解,调节pH值使灭菌后为7.3±0.1，加入琼脂，加热融化后，滤过，再加入其余成分，摇匀，分装,115℃灭菌30分钟，制成高底层(2～3cm)短斜面。　　8、四硫磺酸钠亮绿增菌液(TTB)　　胨　　5g　　硫代硫酸钠　　30g　　牛胆盐　　1g　　水　　1000ml　　碳酸钙10g　　取上述成分，混合，微温使溶解，121℃灭菌20分钟。

7、　　临用前，取上述培养基，每10ml中加入碘溶液(取碘6g与碘化钾5g，溶于20ml水中)0.2ml和0.1％亮绿溶液0.1ml，混匀。　　9、沙门氏、志贺氏菌属琼脂培养基(SS)　　胨　　5g　　硫代硫酸钠　　8.5g　　牛肉浸出粉　　5g　　　　1％中性红溶液　　2.5ml　　乳糖　　10g　　　　0.1％亮绿溶液　　0.33ml　　牛胆盐　　8.5g　　　　琼脂　　20g　　枸橼酚钠　　8.5g　　水　　1000ml　　枸橼酸铁铵　　1g　　除糖、指示剂、琼脂外，取上述成分混合，加热使溶解，调节pH值使灭菌后为7.2±0.1，滤过，加入

8、琼脂，加热融化后，121℃灭菌20分钟，再加入其余成分，摇匀，冷至约60℃，倾注平皿。　　10、胆盐硫乳琼脂培养基(DHL)　　胨　　20g　　枸橼酸钠　　1g