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1、A对高血压大鼠左心室肌肾素一血管紧张素系统不同成分表达量影响'>丹参酮IIA对高血压大鼠左心室肌肾素一血管紧张素系统不同成分表达量影响［摘要］目的：探讨丹参酮IIA（Tan）对肾性高血压大鼠肥厚左心室肌中肾素-血管紧张素系统（RAS）不同成分表达的影响。方法：建立大鼠两肾一夹型肾血管性高血压模型。实验中，所有大鼠在手术前即被随机分为4组（n=15）：假手术（Sham）组、高血压模型（Model）组、丹参酮IIA低、高剂量组。给药组于肾动脉缩窄术后第5周开始分别给予丹参酮IIA35,70mg•kg-1•d-lo术后每周采用标准尾套法检测大鼠血压。给药8周后处死大鼠，分离左心室，用
2、于检测左心室重/体重、心肌胶原含量、心肌RAS不同成分表达量，包括血管紧张素转换酶（ACE）、血管紧张素转换酶2（ACE2）、血管紧张素1型受体（AT1R）和Mas受体的mRNA表达量，以及心肌血管紧张素II（Angll）.血管紧张素（1-7）［Ang（1-7）］含量。结果：与假手术组相比，高血压模型组大鼠肥厚左心室中AngII,Ang（1-7）含量（P2.3心肌胶原含量检测由于胶原蛋白中務脯氨酸的含量较为固定，约为13.4%,因而组织中胶原蛋白含量通常是通过检测其中軽脯氨酸的含量，此数值乘以7.46来计算的［8］。本研究中，释脯氨酸含量的检测参照试剂盒说明操作。称取100mg
3、心肌组织匀浆，加至6mol•L-1盐酸中经120°C酸解6h,用NaOH调节pH至7.0。3500r•min-1离心10mino取部分上清液做检测，按照试剂盒说明操作。最后在UV-754型分光光度计558nm处比色测定。测定时，同时设定测定管、标准管和空白管，蒸馆水调零，测定各管吸光度。按照试剂盒说明所列公式计算心肌軽脯氨酸含量，换算成每克心肌组织的務脯氨酸含量，此数值乘以7.46即得心肌胶原含量(mg•g-l)o2.4心肌AngII,Ang(1-7)含量检测取心肌100mg研磨、加PBS匀浆，3000r•min-1离心15mino取上清液，于-80°C保存待测。ELISA检测
4、AngII,Ang(1-7)水平，操作严格按照试剂盒的要求进行。2.5心肌RAS成分mRNA表达量检测采用RT-PCR法检测心肌组织ACE,AT1R,ACE2,Mas受体mRNA表达量。采用Trizol法提取心肌组织总RNA,以总RNA为模板逆转录合成互补的cDNAo最后，以cDNA为模板，加入特异引物、PCR反应缓冲液等，构成PCR反应体系，在下述反应温度条件下PCR扩增目的基因序列。各目的基因的引物见表loPCR扩增条件为：94°C3min；94°C30s,58〜62°C30s,72°C45s,35个循环。扩增反应在BioRADiCycleriQ型定量PCR仪(Bio-Ra
5、dLaboratories,美国)中进行。扩增产物经琼脂糖凝胶电泳，电泳条带被扫描并储存为t辻f图片。采用ImageJ(NIH,Bethesda,美国)软件，对电泳条带的吸光度值进行检测分析。GAPDH为内参照基因，以目的基因表达量/GAPDH表达量为目的基因的相对表达量。每组实验重复3次。2.6统计学分析全部数据以土s表示，应用SPSS12.0软件作单因素方差分析，P本研究结果显示，高血压大鼠肥厚心肌中促高血压的经典RAS成分(ACE,AngII,ATlR)以及新的抗高血压RAS成分［ACE2,Ang(l-7),Mas］的mRNA表达量均明显增加。那么，在经典促高血压RAS成
6、分与新的抗高血压RAS成分之间，究竟是谁在高血压大鼠心脏中发挥着主要作用呢？通过对Ang(1-7)/AngII和ACE2/ACE的计算，发现高血压组大鼠心肌的Ang(1-7)/AngII和ACE2/ACE均低于假手术组。这提示，在高血压大鼠心脏中新的抗高血压RAS成分处于相对表达不足的状态，这可能导致高血压大鼠心脏中主要表现为促高血压RAS成分过度激活的作用，即心肌肥厚和胶原堆积。而应用丹参酮IIA治疗，虽然未能降低高血压，但在抑制心肌肥厚和胶原堆积的同时，既降低心肌中促高血压RAS成分(ACE,AngII,AT1R)的表达，又进一步增强抗高血压RAS成分［ACE2,Ang(1
7、-7),Mas］的表达。尽管血液循环中RAS成分也有可能促进心肌肥厚的发生，但是现有研究显示心脏局部产生的RAS成分在高血压心脏肥厚中起着更为重要的作用[15]。据此推测，丹参酮IIA对RAS这些不同成分表达的调控作用，至少部分地促进了高血压大鼠心肌肥厚及纤维化的消退。[参考文献][1]PaulM,MehrAP,KreutzR.Physiologyoflocalrenin-angiotensinsystems[J]・PhysiolRev,2006,86(3)：747.[2]VaragicJ,
