猪繁殖和呼吸综合征病毒gp5和m蛋白重组腺病毒对猪体安全性和免疫效力的研究

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1、攘要猪繁殖雩呼吸综合征病毒GP5和耩蛋自重组腺病毒对猪体安全性和免疫效力研究摘要猪繁殖与呼啵综合瓴(Poreinereproductivoandrespiratorysyndrome，PRRS)是猪砖一麓重要传染病。罄黄瘸予{委转PRRS的疫苗骞弱毒疫镑和灭活菠蔫，但免疫效力均不够稳定，而且弱毒疫苗存在反租危险，灭活疫苗诱导产生的抗体水平很低，蕊苓稳定。PRRSV蓥毽王程蔷是薅袁霹}究戆热点之一。PRRSV酌孛争袤缓主要控5-GP5爝白上。M蛋白是欧美毒株间最慷穹的结构蛋白，也具有中和表位，并与GP5礞白形成蒡嚣二浆终，此二聚烬可§&对GP5蛋密戆转运、加工务成熟有关。秘砖，GP5务挝髓

2、白也可引起细胞免痰。腺病蕊载体已被广泛用于研制人类和各种动物基因工程疫蕊；为了研刳PRRSV基戳工程疫苗，本实验室撼建了能稳定袁选PRRSVGP5争M蛋白的重组腺病毒rAO-GP5和rAd-M。接种小鼠可谤导产生PRRSV特异性RLISA抗体和中扣抗体。拳研究则将这蹲砖重级艨病毒接砖猪体，对其安全蛀避行译饽，并测定其免疫保护效力。(1)安全性评估：将12头约30日龄PRRSV阴性断奶健康仔猪随机分为3组，隔离饲养，每缎4头。一纽接种表达猪繁殖与哮吸综合征病毒(PRRSV)GP5蛋白萤组缘病毒(tAd．oPS)，弼一纽接种表达猪繁殖号呼吸综合征病毒(PRRSV)M蛋白重组腺病礤(tAd．M

3、)，另外一纽作为空白对照熏臻。隔离饲养，观察临床症状，测量体溢。定期采集血清、鼻拭子、粪便和猿随泥土，甩PCR方法检测重组繇病毒和野生型鼹病毒的病毒血癌和排尝情况。结果为仔猪接种重组腺病毒后糖神、食欲正常；2周内体温与空白对照纽没有晴显蕨并；猜血清、彝拭子、粪便和猪舍环境中重缀腺病毒旋其野生型腺病毒检测均为阴性，表明这两种燕组腺煽毒对猪体具有很好的安全性。按《农业转基因生物安全评价麓理办法》，逸蕊种重妻蔽绦病毒藏物安奎性属I级。(2)免疫效力测定：将35关秘30霹龄PRRSV蕊性断弼健康仔猪随瓿分秀5鲑，隔离饲养，每氟4岳。矮中一级为空白对照组，其它嘲组分别接种tAd—GP5、tad—M

4、、rAd-GPS／rhd-M(v／v=1混争病豢波)争PRRSV—Resp臻毒秣。女己瑟3争嚣寇，不陵时阕毒釜溺PRRSV特异褴抗舔。结果为免疫后14和45d分别可检出PRRSVELISA抗体和中和抗体；免疫后60d，3令腺病毒免疫甄ELISA抗体滴庭均逸l：2400以上，与PRRSV-Resp弱毒免疫鳃相豫；IⅡ猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5和M酯白重龃腺病毒对猪体安全性和免疫效力研究免疫后90d，3个腺病毒免疫组中和抗体滴度迭1：6以上，但低于PRRSV-Resp弱毒免痰缎；研毙结果遂表明rhd-GP5免疫纽和rAd-GP5／rAd-M璇夸免疫纽ELISA抗傣水平始终高于rAd-M免疫

5、组。同时将另外15兴仔猪免疫随机分为5级，隔离饲养，摄纽3头，按上述方法免疫，免疫君28d逮行攻毒曝护试验。结果为泰免疫缎攻毒君3d全部出现体温升高和临床藏状，莉4个免疫组攻务后3d平均体温明显低于未免疫纽，朱盘琨势常滔瘩疰状；3令爨病毒免疫经猪病毒血痘和薜毒辩阕饭为2舞，与PRRSV-Resp弱毒免疫组相似，而未免疫组病毒血癌和排毒时间至少60d；攻毒后7—14d，3令稼癌毒免疫妻基ELISA抗俸争孛争抗黎拳乎明显舞蔼，为泰免疫垂藏在凌毒露14d才检测到ELISA抗体。研究表明，tad-GP5和rAd-M重组腺病毒，同弱毒苗一样可谤零猪体产生孛务抗镄，劳使猪依建立：跨异的免疫记忆，为猪

6、臻捉徭一定镌曝护力。关键谰：猿繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)；重缎糠癌尝(rAdV)：PRRSVGP5餐白；PRRSVM蛋白；受全性；免疫效力IVABSTRACTSARETYAND耶舢JNoGENICrrYoFT衄RECo．ⅣⅡ；D洲TADENoⅧI，SESEXPRESSⅨGGP5ANDMPRoTEINoFPoRC姗REPRoDUCTIVEANDRESPⅡ认ToRYSYNDRoM匝VIRI，SINPIGLETSPorcinereproductiveandrespiratorysyndromevirus(PRRSV)hasbeenrecognizedasoneveryimportant

7、swinedisease．Nowtheattenuatedvaccineandinactivatedvaccinewereavailable，butCannotprovidevaccinatedpigsfullprotectionfromheterogenousstains．Theattenuatedvaccinemightreverttovirulence，andtheinactivatedvaccineisofquestiona