三种菊科植物xth基因克隆和表达特征的研究

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1、苏州大学学位论文使用授权声明!lrrl{IIFIIIIIIIlUrrllllrllIt{f＼2134123本人完全了解苏州大学关于收集、保存和使用学位论文的规定，即：学位论文著作权归属苏州大学。本学位论文电子文档的内容和纸质论文的内容相一致。苏州大学有权向国家图书馆、中国社科院文献信息情报中心、中国科学技术信息研究所(含万方数据电子出版社)、中国学术期刊(光盘版)电子杂志社送交本学位论文的复印件和电子文档，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存和汇编学位论文，可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数

2、据库进行检索。涉密论文口，本学位论文属在——年一月解密后适用本规定。非涉密论文口论文作者签名：墨!：!k丕日导师签名：f、／，p期：矽J厶、D‘与三种菊科植物XTH基因的克隆与表达特征的研究中文摘要木葡聚糖内糖基转移酶／水解酶(Xyloglucanendotransglycosylase／hydrolase，XTH)是一种重要的细胞壁修饰酶，在植物的细胞生长和生命活动中起着关键的作用。为研究观赏植物中XTH基因结构以及在花瓣生长发育过程中的表达特征及功能，本研究以菊花、孔雀草和大丽花等三种菊科植物为研究对象，从花瓣中提

3、取总RNA，克隆了XTH编码基因的cDNA序列。在此基础上，进一步研究了大丽花XTH基因(DpXTH)的结构及表达特征，取得了如下试验结果。1．利用RT-PCR技术，克隆了菊花和孔雀草花瓣咒旧基因的eDNA序列，分别命名为CmXTH(Genbank：HM752243)和TpXTH(Genbank：JNl64663)，两者开放读码框的核苷酸序列为882bp，编码293个氨基酸残基，其中包含了XTH的活性位点DELDFEFLG。Blast分析结果表明，Cm腰日和TpXTH与同为菊科植物的大丽花、非洲菊的同源性最高；通过聚类

4、分析发现，CmXTH和TpXTH基因编码的多肽与拟南芥XTH家族中第一组的At．XTH7聚类到同一组，推测CmXTH和TpXTH具有木葡聚糖转糖苷酶和木葡聚糖水解酶两种活性。2．利用3’RACE技术，获得了大丽花花瓣DpXTHl基因的3’末端序列(Genbank：JN389794)，克隆片段序列长为542bp，其中非编码区长190bp。以分段PCR法扩增得到了l条大丽花XTH基因组DNA序列，序列长1293bp，包含4个外显子与3个内含子，其外显子区域与DpXTHlmRNA序列的相似性达93．52％，两者所编码的氨基酸

5、序列同源性为93．49％，推测克隆的XTH基因组DNA序列为DpXTHl的同源基因，故命名为DpXTH2(Submisskml523046)。通过与拟南芥XTH基因比对分析，发现DpXTHl与拟南芥At-XTH7同源性较高，DpXTH2外显子序列与At-XTH6同源性较高，而At-XTH7和At-XTH6同属于拟南芥第一组XTH基因，因而推测DpXTHl和DpXTH2编码的蛋A也具有木葡聚糖转糖苷酶和木葡聚糖水解酶两种活性。以基因组DNA为模板，使用hiTAIL．PCR技术，分离获得了DpXTH2基因起始密码子上游长为

6、125bp的部分序列。根据上述三方面试验结果，初步探明了大丽花花瓣DpXTH基因的结构特征。中文摘要三种菊科植物XTH基因的克隆与表达特征的研究3．分别以口．actin、GAPDH和18SrRNA为内参基因，使用半定量RT-PCR技术，检测了DpXTHl在大丽花花瓣生长发育过程中的表达变化。以∥．actin和GAPDH为内参基因的结果显示，在花瓣生长发育的整个过程中，DpXTHl的表达量持续增加，表明DpXTHl可能不仅与花瓣的生长有关，而且与花瓣的衰老也有密切关系。另一方面，以18SrRNA为内参基因的试验结果与此有

7、所不同，说明18SrRNA作为内参基因并不适用于大丽花花瓣发育相关基因表达的检测。关键词：菊科植物；XTH基因；分子克隆；基因结构；表达特征II作者：孙悦指导教师：谈建StudyonthecloningandexpressioncharacterizationofXTHgenesinthreeCompositaeplantsAbstractXyloglucanendotransglycosylase／hydrolase(XTH)，animportantcellwallmodificationenzyme，playsak

8、eyroleintheexpansionofcellandthelifeactivitiesofplant．Inordertostudythefunction，expressionpatternandactionmechanismofXTH，XTHcDNAswereclonedfrompetalsofChrysanthemumxm