口蹄疫灭活疫苗中vp1基因分析方法的建立及应用

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1、新疆农业大学硕士学位论文口蹄疫灭活疫苗中VP1基因分析方法的建立及应用姓名：赵毅申请学位级别：硕士专业：预防兽医学指导教师：黄炯;冉多良20090601口蹄疫灭活疫苗中VPl基因分析方法的建立及应用摘要应用口蹄疫灭活疫苗中加入酒精冻融离心破乳纯化抗原技术，对口蹄疫白油乳化灭活疫苗病毒中的RNA进行提取，并与提取的制苗病毒、二乙烯亚胺灭活病毒的RNA，就VPl基因进行了逆转录聚合酶链式反应扩增、核酸序列测定，利用DNAStar软件包中的SepMan程序进行序列拼接，将所得序列进行同源性比较分析，结果显示3种来源的VPl基因片段长

2、度均为639bp，与预期目标相符，核苷酸序列显示，3种方法处理的病毒VPl同源性为100％，说明灭活剂BEI和乳化工艺没有全部破坏口蹄疫病毒VPl基因核酸。由此，建立了一种检测、分析口蹄疫灭活疫苗毒株VPl基因的核酸序列的新方法。通过以上建立的方法，对国内三个不同厂家的口蹄疫灭活疫苗中的VPI基因与国内外口蹄疫病毒参考序列进行同源性、差异性比较分析，绘出遗传发育树图谱。结果显示，有2个厂家疫苗O型病毒株为泛亚拓扑型，1个厂家为古典中国拓扑型。2个泛亚拓扑型疫苗株之间的同源性为96．2％，他们与国际上流行毒株O／LY／2000、

3、O／MOG／2000、O／1734／RUS／2000、O／NY00、UKG／8098／2001的VPl基因核苷酸同源性达94．4""98．4％，亲缘关系密切。本实验建立了一种对口蹄疫成品疫苗中VPl基因提取和分析的实用方法，对于评价口蹄疫疫苗毒株与流行毒株间的关系，为我国口蹄疫免疫预防提供有效可靠的疫苗等方面，具有重要的实际意义。关键词：口蹄疫病毒；灭活疫苗；RNA抽提方法；VPl基因；序列分析StudyontheanalysismethodsestablishmentandapplicationofVPlgenedetect

4、ionfrominactivatedVaCClnediseaseAbstractagainstfoot··and--mouthUsingEmulsionbreakingpurificationantigentechnologytodealinactivatedvaccinesagainstFoot·and-MouthDisease，withalcohol，freezing&thawingandcentrifuging．ExtractiongeneVPlRNAfromwhiteoilemulsificationwithinact

5、ivatedvaccinesagainstI研VlDV,livevirusandinactivatedvaccinebyBEI，RT-PCRamplified，cDNAsequencingandusedSepManofDNAStarSoftwarepackagetoconnectedtogetherthesequences．Theresultsindicatethat，VPlRNAsisolatedfromlivevirus，virusinactivatedbyBEIandinactivatedvaccineemulsifie

6、dbywhiteoilaccesstoallofthespecificobjectivesoffragments，andtheexpected639bpfragmentmatch．NucleotidesequencerevealedthatvPlhomologyoftheviruswas100％isolatedbythreemethods．BEIandtheemulsificationprocessdonotdamagewholeRNAstructureofVPl．TheisolatedmethodtoRNAcanbeused

7、toanalysesequenceofVPlgene，whichderivedfromeitherliveorinactivatedFoot．and．mouthDiseasevirus．IsolatedVPlgenebythismethodstodealinactivatedvaccineagainstfoot-and—mouthdisease，theseinactivatedvaccinecomefromthreedifferentmanufacturers．TheSequenceofVPlgenebetweenthegai

8、nedsequenceandotherpublishedsequenceofFMDVcomparedandanalyzedbythesoftwareofDNAStar,andDrewthephylogenetictree．Analysisresultshowedthattwo