大鼠双下肢伸直襁褓体位下髋关节脱位病理演变组织学观察

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1、目录摘要„„„„„„„„„„„„„„3前言„„„„„„„„„„„„„„5研究一„„„„„„„„„„„„„„6材料与方法„„„„„„„„„„„„6结果„„„„„„„„„„„„„„8讨论„„„„„„„„„„„„„„9研究二„„„„„„„„„„„„„„10材料与方法„„„„„„„„„„„„11结果„„„„„„„„„„„„„„12讨论„„„„„„„„„„„„„„16研究三„„„„„„„„„„„„„„17材料与方法„„„„„„„„„„„„17结果„„„„„„„„„„„„„„19讨论„„„„„„„„„„„„„„29参考文献„„„„„„„„„„„„„31英文摘要„„„„„„

2、„„„„„„„34致谢„„„„„„„„„„„„„„38略缩词表„„„„„„„„„„„„„39论文原创性声明„„„„„„„„„„40附：综述„„„„„„„„„„„„41第2页大鼠双下肢伸直襁褓体位下的髋关节脱位病理演变的组织学观察专业：外科学研究生：苗兴广导师：陈刚副教授.中文摘要.背景知识：发育性髋关节发育不良（DDH）是指因某种因素导致患儿出生时或者在发育过程中髋臼陡浅甚至股骨头脱出髋臼之外的病理现象，描述婴儿及儿童先天性或发育性髋关节解剖结构异常的统称。DDH包括髋关节不稳定、半脱位、脱位和髋臼发育不良。DDH的病因及发病机制至今不明，除先天因素外，生后体

3、位因素，肌力失衡、关节囊松弛等起重要作用。目的：本实验拟通过人为改变出生后体位即双下肢伸直襁褓体位来研究该体位下髋臼关节软骨的病理组织学演变。髋臼软骨复合体在发育过程中钙盐沉积骨化从而形成骨性髋臼，所以在此过程中，髋臼软骨复合体的形态及发育改变直接影响髋臼的最终形态。髋臼软骨复合体的正常生长发育通过软骨细胞不断增殖和凋亡的结果，应用免疫组化方法研究双下肢伸直襁褓体位下新生幼鼠髋臼软骨形态及细胞的成熟、增殖和凋亡情况，以研究髋臼发育不良与髋臼软骨复合体的细胞成熟、增殖及凋亡表达情况之间的关系。方法：制作大鼠下肢伸直襁褓体位及研究该体位下大鼠髋臼的病理组织学演变1

4、.下肢伸直襁褓体位大鼠模型制作。1.1Wistar新生幼鼠6窝（每窝12只，雌雄各半）1.2试剂：Brdu原液，Abcam公司提供。1.3模型制作：刚出生即新生幼鼠1号窝随机取3只雌鼠、3只雄鼠进行编号，抽取的鼠双腿、双髋关节处医用胶带缠绕固定，呈髋关节内收伸直、双下肢并拢位，并固定尾部活动，膝关节可活动，其余幼鼠做对照，不作处理。每日下午松解固定胶带一次，松解半小时后重新固定。所有幼鼠均由母鼠母乳同时喂养，笼内自由活动。1号窝分别于3，6，9天后处死所有实验组与对照组幼鼠，进行取材，制作石蜡标本。处死前2小时，行腹腔内注射Brdu原液，浓度10mg/ml。第

5、3页1.42号窝新生幼鼠同法处理，处死前2小时，腹腔内注射Brdu原液，浓度10mg/ml。1.5以上各组每组各12例髋关节。2.动物髋臼组织学及分子生物学实验。2.1制作髋臼软骨复合体整体组织石蜡切片(冠状面，附带少量骨组织，充分展示其三维立体结构)，部分上述切片使用番红O-快绿方法染色，观察各组髋臼大体形态学变化。2.2免疫组化显示软骨细胞中pthrp（甲状旁腺相关肽）在髋臼软骨复合体中的变化。2.3免疫组化显示各区骺板内Brdu标记的处于有丝分裂期软骨细胞的分布.，应用tunel法检测双下肢伸直襁褓体位下骺板软骨细胞的凋亡。结果：双下肢伸直襁褓体位下大鼠

6、模型形态学观察结果下肢伸直襁褓体位动物模型下大鼠髋臼生长发育发生改变，实验组髋臼与对照组髋臼相比外形上发生显著改变，实验组有假臼形成，且实验组髋臼与对照组髋臼相比边缘不整，变浅变薄。番红O-快绿染色观察实验组髋臼软骨与对照组相比各支宽度增加，细胞排列紊乱，粗糙。双下肢伸直襁褓体位下大鼠髋臼软骨细胞pthrp（甲状旁腺相关肽）的表达结果实验组pthrp阳性细胞表达于髋臼软骨复合体的髂骨支、耻骨支、坐骨各支肥大区，但比对照组高（p<0.01），pthrp阳性细胞数3天组>6天组>9天组。双下肢伸直襁褓体位下brdu标识大鼠髋臼软骨细胞增殖及大鼠髋臼软骨细胞凋亡的结

7、果Brdu:对照组髋臼软骨耻骨支、髂耻骨侧、坐骨支增殖区阳性细胞表达明显高于实验组（p<0.01）。实验组的髋臼软骨耻骨支、髂耻骨侧增殖区阳性细胞个数3天组<6天组<9天组。凋亡：实验组髋臼软骨复合体肥大区凋亡细胞较对照组明显减少，增殖区和静止区凋亡实验组较对照组明显增多（p<0.01）。实验组的髋臼软骨复合体增殖区和肥大区凋亡细胞个数3天组<6天组<9天组。结论：双下肢伸直襁褓体位下对幼鼠软骨复合体不同区域软骨细胞成熟、增殖、凋亡有明显的影响，是髋臼发育不良的重要影响因素，可能是诱发是DDH的病因第4页之一。关键词：大腿伸直襁褓体位，动物模型，番红O-快绿，

8、细胞增殖，细胞凋亡，甲状旁腺相关肽激素