rhbmp2rhvegf壳聚糖纳米粒制备及体外释放实验研究

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1、原创性声明本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均己在论文中作了明确的说明。作者签名：日期：诩臣年上月幺学位论文版权使用授权书本人了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留学位论文并根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部分内容，可以采用复印、缩

2、印或其它手段保存学位论文。阿时授权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》，并通过网络向社会公众提供信息服务。作者签名：导师签名趣日期：2竺生年姜月二磊摘要rhBMP．2．rhVEGF壳聚糖纳米粒的制备与体外释放的实验研究目的：分别制备出包含有重组人骨形态发生蛋白．2(RecombinantHumanbonemorphogeneticProtein，BMP．2)、血管内皮生长因子(VascularEndothelialGrowthFactor，VEGF)以及两种因子混合的壳聚糖(chitosan，CTS)纳米粒，并对

3、纳米粒的体外释放效果进行评价，为进一步研究两种蛋白因子在生物学功能上的相互影响及联合应用效果等体内实验奠定基础。方法：1．以三聚磷酸钠(sodiumtripolyphosphate，TPP)为交联剂，采用离子交联法，通过空白纳米粒筛选成形范围，分别制备出空白、包载rhBMP．2、rhVEGF、r11BⅧ．2．VEGF复合的壳聚糖纳米粒，对上述因子蛋白浓度、CTS浓度、TPP浓度、CTS与TPP质量比这几个因素进行正交工艺验证，然后通过透视电镜观察纳米粒形态及分布，粒径分析仪测定纳米粒粒径及Zate电位。2．利用酶联免疫吸附试验(Enzyme．

4、1inkedimmunosorbentassay，ELISA)测定载药壳聚糖纳米粒的包封率并描述其缓释药动学，计算各个时间点的累积释放率，绘制释放曲线。结果：1．离子交联法制备壳聚糖纳米粒操作简单、工艺稳定，制得的纳米粒规则呈球形、分散性好、粒径集中。2．rhVEGF壳聚糖纳米粒制备最优化工艺条件为：rh．VEGF浓度为10ng／ml，CTS浓度为2mg／ml，TPP浓度为1．5mg／ml，CTS／TPP为5：1，此时所得rhⅦGF壳聚糖纳米粒粒径为346．2+2．4nm，PDI为0．219+0．017，Zeta电位为24．0+0．9，包封率

5、达98．43士1．10％。3．rhBMP．2壳聚糖纳米粒制备最优化的工艺条件为：rhBMP．2浓度为50ng／ml，CTS浓度为3mg／ml，TPP浓度为lmg／ml，CTS／TPP为5：1，此时所得rhBMP．2壳聚糖纳米粒粒径为333．0土2．3nm，PDI为0．463士0．013，Zeta电位为30．0土0．8，包封率达92．63+1．33％。4．rhBMP．2．r11ⅦGF壳聚糖纳米粒制备最优化的工艺条件为：rhBMP．2浓度为50ng／ml，rhVEGF浓度为lOng／ml，CTS浓度为硕士学位论文摘要lmg／ml，TPP浓度为1．

6、5mg／ml，CTS／TPP为5：1，此时所得rlmMP．2．rh'VEGF壳聚糖纳米粒粒径为396．0+1．8nm，PDI为0．403+0．005，Zeta电位为29．8士1．8，rhⅦGF包封率为86．6+0．8％，rhBMP．2包封率为93．72+1．30％。5．三种载蛋白的壳聚糖纳米粒体外缓释曲线相近，释放最初24小时，释药量为1％-2％，后面快速上升，到第20天时，曲线趋于平缓，30天时，释药量达90％。结论：1．采用离子交联法制备壳聚糖纳米粒时，蛋白浓度、CTS浓度、TPP浓度、CTS与TPP质量比对纳米粒的粒径、Zeta电位、包

7、封率等有明显影响。2．通过本实验制备出的rhBMP．2．rhVEGF壳聚糖纳米粒具有良好的体外缓释性能。图20幅，表17个，参考文献44篇。关键词：重组人骨形态发生蛋白．2；血管内皮生长因子；壳聚糖；纳米粒；体外释放分类号：R945III硕士学位论文AbstractPreparationofrhBMP--2--rhVEGFloadedchitosannanospheresanditspropertiesinvitroAbstract：ObjectiveUsingchitosanasacarriertopreparenanospheres，wh

8、ichinvolvedwithRecombinantHumanBoneMorphogeneticProtein．2(rhBMP-2)andvascularendot