皮下注射大剂量卵白蛋白诱导小鼠哮喘免疫耐受模型的建立及

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1、１４０４第三军医大学学报，２０１６，３８（１２）ｈｔｔｐ：／／ａａｍｍｔ．ｔｍｍｕ．ｅｄｕ．ｃｎＤＯＩ：１０．１６０１６／ｊ．１０００５４０４．２０１６０２０２４皮下注射大剂量卵白蛋白诱导小鼠哮喘免疫耐受模型的建立及机制初步研究１１２１１１１胡琦，钟世民，汪金玉，范文婷，曾靖，吴雪婷，廖伟（４０００３８重庆，第三军医大学西南医院：１２儿科，胸心外科实验室）［摘要］目的腹部皮下注射大剂量卵白蛋白（ｏｖａｌｂｕｍｉｎ，ＯＶＡ）建立小鼠哮喘免疫耐受模型并对机制进行初步研究。方法选择ＢＡＬＢ／ｃ小鼠１８只为建模对象，按随机数字表法分为３组：哮喘免疫耐受模型组、哮喘

2、对照组、正常对照组，每组６只。哮喘免疫耐受模型组予１０μｇＯＶＡ于０、７ｄ腹腔注射致敏，２１～２５ｄ持续５ｄ予１ｍｇＯＶＡ腹部皮下注射诱导免疫耐受，３５、３６、３７ｄ予１％ＯＶＡ雾化激发；哮喘对照组除了省去２１～２５ｄＯＶＡ皮下注射诱导免疫耐受外，其余同哮喘免疫耐受模型组；正常对照组使用等量生理盐水致敏及激发。末次激发２４ｈ内检测气道反应性，收集支气管肺泡灌洗液（ｂｒｏｎｃｈｏａｌｖｅｏｌａｒｌａｖａｇｅｆｌｕｉｄ，ＢＡＬＦ）计数细胞总数及细胞分类计数，ＥＬＩＳＡ法检测血清ＯＶＡ特异性ＩｇＥ、ＢＡＬＦ中ＩＬ４、ＩＦＮγ、ＩＬ１０的表达，ＨＥ染色观察肺组

3、织病理改变，流式细胞仪检测各组小鼠外周血Ｔｒｅｇ＋细胞占ＣＤ４Ｔ淋巴细胞百分率情况。结果哮喘免疫耐受模型组气道反应性、ＢＡＬＦ中嗜酸性粒细胞计数、ＩＬ４水平及血清ＯＶＡ特异性ＩｇＥ水平明显低于哮喘对照组，差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５）；ＢＡＬＦ中ＩＬ１０明显高于哮喘对照组（Ｐ＜０．０５）；而ＢＡＬＦ中ＩＦＮγ水平与哮喘对照组差异无统计学意义；同时ＨＥ染色发现哮喘免疫耐受模型组肺组织炎症较哮喘对照组明显减轻；流式细胞技术检测发现外周血Ｔｒｅｇ细胞百分比明显高于哮喘对照组，差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５）。结论予致敏小鼠腹部皮下注射大剂量ＯＶＡ可成功诱导

4、小鼠哮喘免疫耐受形成，Ｔｒｅｇ及免疫抑制因子ＩＬ１０参与了免疫耐受的形成。［关键词］卵白蛋白；小鼠模型；支气管哮喘；免疫耐受［中图法分类号］Ｒ３３２；Ｒ３４１；Ｒ５６２．２５［文献标志码］ＡＥｓｔａｂｌｉｓｈｍｅｎｔｏｆｍｏｕｓｅｍｏｄｅｌｏｆｉｍｍｕｎｅｔｏｌｅｒａｎｃｅｏｆａｓｔｈｍａｔｈｒｏｕｇｈｓｕｂｃｕｔａｎｅｏｕｓｉｎｊｅｃｔｉｏｎｏｆｈｉｇｈｄｏｓｅｏｆｏｖａｌｂｕｍｉｎ１１２１１１１１ＨｕＱｉ，ＺｈｏｎｇＳｈｉｍｉｎ，ＷａｎｇＪｉｎｙｕ，ＦａｎＷｅｎｔｉｎｇ，ＺｅｎｇＪｉｎｇ，ＷｕＸｕｅｔｉｎｇ，ＬｉａｏＷｅｉ（Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆ２

5、Ｐｅｄｉａｔｒｉｃｓ，ＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＣａｒｄｉｏｔｈｏｒａｃｉｃＳｕｒｇｅｒｙ，ＳｏｕｔｈｗｅｓｔＨｏｓｐｉｔａｌ，ＴｈｉｒｄＭｉｌｉｔａｒｙＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｃｈｏｎｇｑｉｎｇ，４０００３８，Ｃｈｉｎａ）［Ａｂｓｔｒａｃｔ］ＯｂｊｅｃｔｉｖｅＴｏｅｓｔａｂｌｉｓｈａｍｏｕｓｅｍｏｄｅｌｏｆｉｍｍｕｎｅｔｏｌｅｒａｎｃｅｏｆａｓｔｈｍａｔｈｒｏｕｇｈｓｕｂｃｕｔａｎｅｏｕｓｉｎｊｅｃｔｉｏｎｗｉｔｈｈｉｇｈｄｏｓｅｏｆｏｖａｌｂｕｍｉｎ（ＯＶＡ）ｉｎｔｈｅａｂｄｏｍｅｎａｎｄｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｉｔｓｕｎｄｅｒｌｙｉｎｇｍｅｃｈ

6、ａｎｉｓｍ．ＭｅｔｈｏｄｓＷｉｔｈａｒａｎｄｏｍｎｕｍｂｅｒｔａｂｌｅｍｅｔｈｏｄ，１８ｆｅｍａｌｅＢＡＬＢ／ｃｍｉｃｅｗｅｒｅｄｉｖｉｄｅｄｉｎｔｏ３ｇｒｏｕｐｓ：ａｓｔｈｍａｔｉｃｉｍｍｕｎｅｔｏｌｅｒａｎｃｅｍｏｄｅｌｇｒｏｕｐ，ａｓｔｈｍａｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐａｎｄｎｏｒｍａｌｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ，ｗｉｔｈ６ｍｉｃｅｉｎｅａｃｈｇｒｏｕｐ．Ｔｈｅｍｉｃｅｉｎｔｈｅｍｏｄｅｌｇｒｏｕｐａｎｄａｓｔｈｍａｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐｗｅｒｅｓｅｎｓｉｔｉｚｅｄｗｉｔｈ１０μｇＯＶＡｂｙｉｎｔｒａｐｅｒｉｔｏｎｅａｌｉｎｊｅｃｔｉｏｎｉｎｔｈｅａｂｄｏ

7、ｍｅｎｏｎｄａｙ０ａｎｄｄａｙ７．Ｔｈｅｍｉｃｅｉｎｔｈｅｍｏｄｅｌｇｒｏｕｐｉｎｄｕｃｅｄｉｍｍｕｎｅｔｏｌｅｒａｎｃｅｗｉｔｈ１ｍｇＯＶＡｂｙｓｕｂｃｕｔａｎｅｏｕｓｉｎｊｅｃｔｉｏｎｉｎｔｈｅａｂｄｏｍｅｎｅｖｅｒｙｄａｙｆｒｏｍｄａｙ２１ｔｏｄａｙ２５．Ｂｏｔｈｔｈｅｍｏｄｅｌｇｒｏｕｐａｎｄａｓｔｈｍａｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐｗｅｒｅｃｈａｌｌｅｎｇｅｄｗｉｔｈ１％ＯＶＡｏｎｄａｙ３５，ｄａｙ３６ａｎｄｄａｙ３７．Ｔｈｅｍｉｃｅｉｎｔｈｅｎｏｒｍａｌｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐｗａｓｓｅｎｓｉｔｉｚｅｄａｎｄｃｈａｌｌｅｎｇｅｄｗｉｔｈｔｈｅｅｑｕａｌ

8、ａｍｏｕｎｔｏｆｓａｌｉｎｅ．Ｔｈｅａｉｒｗａｙｒｅ