结核分枝杆菌l型检测对结核病诊疗价值的研究

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1、南方医科大学2010级博士学位论文结核分枝杆菌L型检测对结核病诊疗价值的研究ResearchonDetectionofMycobacteriumTuberculosisLFqfordiag"ofTuberculosisormslordhaRnoshsbercul0SIS0IlU课题来源：深圳市罗湖区科学技术局(2009014)学位申请人赵丹导师姓名车小燕研究员专业名称临床检验诊断学培养类型在职培养层次博士研究生所在学院第二临床医学2013年3月31日广州博士学位论文结核分枝杆菌L型检测对结核病诊疗价值的研究博士研究生：赵丹指导教师：车小燕研究员摘要研究背景进入2l世纪后，我国肺结

2、核防治局面依然十分严峻。结核病疫情呈现感染率高、患病率高、发病率高、耐药率高、死亡率高，结核病控制进程慢等“五高一慢”的特点IlI。结核病疫情农村高于城市、青壮年患病率和死亡比例高，严重危害着人民群众的生命安全。结核分枝杆菌(MycobacteriumTuberculosis，MTB)L型(Lform，L)是结核分枝杆菌抵抗外界环境和赖以生存的重要形式，可在体内长期存活、生长、繁殖，导致结核病缓慢地进展、恶化、复发和耐药。近年来国内外的多项研究结果显示，菌阴肺结核约占活动性肺结核病的70％12I，而在菌阴肺结核标本中，MTB．L阳性率约为30％13I；在耐多药结核病(MDR-TB

3、)患者中MTB．L阳性率达50％I引。因此，探索MTB．L检测方法对确定结核感染的性质和进展，选择治疗策略及其效果评价和判定预后、以及修正预防措施具有非常重要的意义。研究目的针对当前结核病防控的严峻形势，以及MTB．L生物学特性和致病性特点，本研究拟系统分析深圳市罗湖辖区结核病感染及耐药状况，建立快速简便、灵敏度高、特异度好的MTB．L的涂片染色和培养药敏的检测方法，并探讨其对结中文摘要核病诊疗的临床价值。研究内容本研究拟开展以下工作：①建立快速简便、灵敏度高、特异度好的MTB-L的涂片染色和培养药敏的检测方法，并进行方法学评价。②采用改进的MTB．L涂片染色方法对深圳市罗湖区慢

4、性病防治院2010年1月至2011年12月期间结核病门诊收治的960例结核病确诊患者及其治疗期间的痰标本同时进行MTB和MTB．L涂片染色检查。③采用改进的MTB．L药敏培养方法对上述痰标本进行MTB．L培养及药敏分析。④采用罗氏药敏培养基对上述痰标本进行MTB培养及药敏分析。⑤分析深圳市罗湖辖区结核病流行现状，MTB和MTB．L的耐药情况，以及其对结核病临床诊断和治疗预后的影响。研究方法1MTB．L涂片染色方法的改进及其方法学评价1．1Ziehl-Neelsen(Z-N)抗酸染色法15I①涂片：收集病例，按《结核病诊断细菌学检验规程》要求，挑取痰标本中干酪样、脓样或可疑部分约0

5、．05～0．1ml，于玻片正面右侧2／3处，均匀涂抹成10ml-n×20nllll的卵圆形痰膜，痰膜朝上静置自然干燥，每位病人涂片2张。②染色：玻片经火焰固定后，滴加石碳酸复红染液盖满痰膜，在火焰高处徐徐加热，切勿沸腾，出现蒸汽即暂时离开，若染液蒸发减少，应再加染液，以免干涸，加热3～5min，待标本冷却后流水自玻片一端轻缓冲洗，洗去染色液，沥去玻片上剩余的水。自痰膜上端外缘滴加3％盐酸酒精，流过痰膜，需脱至痰膜无可视红色为止，脱色应单片进行。流水自玻片一端轻缓冲洗，冲去脱色液，沥去玻片上剩余的水。滴加亚甲蓝复染液，染色30S。流水自玻片一端轻缓冲洗，冲去复染液，沥去标本上剩余的

6、水。③镜检：待玻片干燥后镜检，记录结果。II博士学位论文1．2改良IK抗酸染色法

7、6I①涂片：收集病例，按《结核病诊断细菌学检验规程》要求，挑取痰标本中干酪样、脓样或可疑部分约O．05～O．1ml，于玻片正面右侧2／3处，均匀涂抹成10mmx20mm的卵圆形痰膜，痰膜朝上静置自然干燥，每位病人涂片2张。②染色：涂片于空气中自然干燥后，丙酮固定：玻片倾斜，蒸馏水自一端流下清洗。加苯酚品红液后置湿盒内，于室温24h后细流水洗。自痰膜上端外缘滴加0．5％盐酸乙醇脱色剂，脱至无红色为止。加复染剂亚甲蓝，复染0．5～2min，水洗后干燥。③镜检：待玻片干燥后镜检，镜检方法、结果判断和分级报

8、告标准同Ziehl-Neelsen抗酸染色法。1．3本研究改进的MTB．L抗酸染色法(以下简称“MTB．L抗酸染色法”)①涂片：收集病例，按《结核病诊断细菌学检验规程》要求，挑取痰标本中干酪样、脓样或可疑部分约一0．05～O．1ml，于玻片正面右侧2／3处，均匀涂抹成10mrllx20nlln的卵圆形痰膜，痰膜朝上静置自然干燥，每位病人涂片2张。②染色：玻片经火焰固定后，滴加石碳酸复红染液盖满痰膜，然后加滴2～3滴双氧水，混匀，保持染色1～2min。流水自玻片一端轻缓冲洗，洗去染