七氟醚预处理对三品系果蝇缺氧损伤的保护作用

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1、四川大学临床医学硕士科学学位论文ConclusionOurinvestigationshowedthatsevofluranepreconditioningwithproperconcentrationsproducedsimilarprotectiveeffectstoanoxiapreconditioningbyreducingthedeathrateinthreestrainsoffi'uitflies．KeywordsDrosophilamenlanogaster,seVonu瑚epreconditioning．anoxiapreconditioning,anoxia5四

2、川大学临床医学硕士科学学位论文七氟醚预处理对三品系果蝇缺氧损伤的保护作用研究生：尹妙妙导师：刘进教授刖菁缺血／缺氧是临床上许多疾病的病理生理基础，因此探索组织缺血缺氧的损伤机制，并寻求安全、有效的防治措施成为医学领域的重要课题。1986年删u首先提出了缺氧预处理的概念。缺血预处理是目前所知的一种最强内源性保护作用吲，一经提出，立即吸引了国内外医学者的关注，并对此现象及其机制做了大量的研究。但是关于预处理的研究结果仍长期停留在实验室【2】，主要原因在于(1)安全性差。如果对动物整体实施预处理的策略不当，不仅不能诱导保护效果，而且可能引起缺氧损伤【4】；(2)可行性差。模拟高海拔低氧

3、对动物实施整体缺氧预处理需要的时程较长，其可行性降低【5】；(3)研究对象与临床不符。研究结果大多来自细胞和器官水平，不能直接应用于临床。是否存在安全、可行的能够应用于临床的预处理方法?为解决这个6四川大学临床医学硕士科学学位论文难题人们提出了药物预适应的方法，即用药物来激发或模拟内源性保护物质呈缺氧预适应样的器官保护作用。挥发性麻醉药一七氟醚作为一种新型的麻醉药不仅因其作用时间短、对循环呼吸影响小等优点受到临床医生的青睐，同样因为其对抗器官缺氧缺血损伤的作用【6，71而受到研究者们的重视。研究显示七氟醚预处理能产生类似缺血预处理相似的保护作用[8～。本文即以三品系果蝇为对象研究

4、七氟醚预处理对生物整体的作用。本研究以缺氧预处理为切入点，利用自制的缺氧处理实验装置，在建立窒息的三品系果蝇动物模型基础上，通过观察其存活情况，比较不同浓度七氟醚预适应和缺氧预适应的果蝇对缺氧损伤的耐受能力。7四川大学临床医学硕士科学学位论文材料与方法实验动物：用七氟醚筛选的三品系成年黑腹果蝇(敏感型s、耐药型R和野生型I-I)，2～3d龄，雌雄兼备。由本实验室繁殖【101。实验设备和试剂：七氟醚：商品名凯特力，由丸石只要株式会社生产，批号5y18；果蝇培养基：琼脂、蔗糖、玉米粉和酵母混合煮沸而成。麻醉机：Datex．Omeda7900；七氟醚挥发罐：由德国Philis公司提供；

5、多功能监护仪：SpaceLabl700，由德国Philis公司提供；密闭透明容器：用密封锥形瓶代替；空调：采用实验室中央空调；温度计：沈阳市卫工玻璃仪器厂提供。实验方案：第一步：果蝇七氟醚预处理模型的制备1．1实验装备的准备将IG-ishnan[11】等用于观察果蝇缺氧反应的模型加以改进。如图l示：玻璃瓶为300ml的锥形瓶。瓶内有一个用离心管制成的塑料管，管口用单层纱布敷上，以防果蝇跑出，管顶用细针扎数十个小孔以利气体交换。g四川大学临床医学硕士科学学位论文锥形瓶的密封塞上插入一长进气管一短出气管，长的进气管需长至锥形瓶底部，短的出气管则为刚进入锥形瓶内为佳。在密封塞周围涂上硅

6、酯以增强密封效果，用50ml注射器抽吸负压，以证实锥形瓶内密封无可察觉的漏气。进气管口接两个三通，分别接高纯氮气(浓度>99．99％)、七氟醚和压缩空气；出气管口接一个三通，一端接氧浓度监测仪探头，一端接水封瓶以平衡大气压并密封锥形瓶。水封瓶用一200ral的烧杯代替，烧杯内加入30ral的自来水。出气管管口置入水封瓶内水平面以下，达到密封锥形瓶的目的。准备上述装置四套，用多功能通气管(图2)将这四套装置以并联的形式连接在一块。1．2锥形瓶内和塑料管内气体浓度的测量1．2．1将气体浓度监测探头分别置于第一个锥形瓶内靠近出气管口处和塑料管的顶部。将锥形瓶进气管的三通打到七氟醚端，打

7、开七氟醚挥发罐，以1L／rain的流速向锥形瓶内通气，当监护仪上显示锥形瓶内的七氟醚浓度达到O．5％、1．O％、1．5％、2．O％和2．5％时，监测塑料管顶部的七氟醚浓度。每次当锥形瓶内七氟醚浓度稳定后，用50ral玻璃注射器(已用硅酯密封)从锥形瓶的出气管口抽取20ral七氟醚气体。四川大学临床医学硕士科学学位论文空气氮气七氟醚图1果蝇缺氧与缺氧预处理模型示意图图2空气、氮气和七氟醚的气体分装装置。1．2．2按照上述方法依次监测第二、第三和第四个锥形瓶内出气口处和塑料管顶部的七