七氟烷预处理抑制缺氧诱导的脑损伤

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1、七氟烷预处理抑制缺氧诱导的脑损伤汪梦霞李健玲梁赵佳钟瞾胡冬华王菲菲田和高兰李雅兰暨南大学附属第一医院麻醉科R的:观察七氟烷预处理对缺氧小鼠脑损伤的影响及其可能机制。方法:将60只雄性C57BL/6J小鼠，随机分为对照（C）组、缺氧（H）组、2%七氟烷预处理30min组（S1+H组）、2%七氟烷预处理60min组（S2+H组）和4%七氟烷预处理30min组（S3+H组），每组10只。缺氧即持续吸入02体积分数为（6.5±0.1）%的氮氧混合气体24h构建缺氧模型;预处理即以02体积分数为（21.0±0.5）%的氮氧混合气体为载气，分别吸入2%七氟烷30min、2%七氟烷60

2、min和4%七氟烷30min,洗脱15min后进行缺氧处理。用光学显微镜及透射电子显微镜（TEM）观察海马CA1区形态学改变；比色法检测血清乳酸脱氢酶（LDH）活性;ELISA测定脑组织促红细胞生成素（EP0）和血管内皮牛.长因子（VEGF）含量;同吋测定脑组织丙二醛（MDA）含量及超氧化物歧化酶（S0D）和谷胱甘肽过氧化物酶（GPx）活性。结果:缺氧24h后，光镜下可见海马CA1区细胞水肿或固缩;各预处理组病理改变轻于H组。TEM下S2+H组细胞超微结构最为完整。H组血清LDH活性及脑组织EPO、VEGF、MDA含量显著高于C组，脑组织的SOD及GPx活性较C组明显降低

3、。七氟烷预处理后血清LDH活性及脑组织EPO、VEGF含量较H组降低，以S2+H组最为显著;脑组织MDA含量及SOD活性降低，而GPx活性有所升高。结论:七氟烷预处理能减轻缺氧引起的脑组织损伤，其机制可能与调节抗缺氧蛋白合成及降低氧化应激有关。关键词：七氟烷;预处理;缺氧;脑损伤;氧化应激;大脑边缘系统的海马与信息处理、空间定位、学习、记忆等认知功能密切相关，是脑结构中对缺血缺氧的敏感部位，其屮又以海马cai区的椎体细胞最为明显m。对于出血、创伤、屮风、围产期脑病和心肺衰竭等疾病患者，脑缺氧是他们共同的病理生理改变。如此类患者行需耍麻醉的手术，选择合适的麻醉药避免引起或加

4、重脑缺氧，是众多临床一线麻醉医生的期望。七氣院(sevoflurane)具有对呼吸道刺激小、诱导苏醒快而完全、血流动力学稳定等众多优点，常用于临床全身麻醉。研宂发现它具有器官保护作用，廖锦华等位1观察到2%七氟烷预处理能有效减少大鼠的心肌缺血再灌注损伤;Park等££研宄显示七氟烷能减轻接近全脑缺血的大鼠海马CA1区细胞的坏死和凋亡。鉴于七氟烷的器官保护作用，木实验在C57BL/6J小鼠模拟临床缺氧状态，观察七氟烷预处理是否对缺氧小鼠的脑损伤有影响，并初步探讨可能机制，为临床上对于存在脑缺氧危险患者的麻醉用药提供实验依据。材料和方法1实验动物6~7周龄雄性C57BL/6J

5、小鼠，体重17~21g,由中山大学实验动物中心提供，合格证号为SCXK(粤)2011-0029。小鼠分笼喂养，实验前适应性饲养1周，相对湿度60%~80%，温度控制在(24土2)°C，动物处理符合暨南大学实验动物管理的相关规定。2主要试剂、器材与仪器七氟焼购自Abbott;乳酸脱氢酶(lacticdehydrogenase,LDH)测定试剂盒购白迈克土物科技股份有限公司；促红细胞土成素(erythropoietin,EPO)和血管内皮生长因子(vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)ELISA试剂盒购自R&DSystems;丙二醛(mal

6、ondialdehyde,MDA)检测试剂盘、总超氧化物歧化酶(superoxidedismutase,SOD)活性检测试剂盒、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathioneperoxidase,GPx)检测试剂盒、Western及IP细胞裂解液购自碧云天生物技术有限公司；BCA法蛋白定量试剂盒购自上海申能博彩生物科技有限公司；WatoEx-20麻醉机及多功能监护仪购自迈瑞;ML-X便携式数字智能测氧仪购自北京航天鹏诚仪器仪表有限公司；光学显微镜购自Nikon;JEM-100CXII/T透射电子显微镜购自JEOL。3方法3.1模型建立及实验分组并适当调整制备模型。实验装罝由有

7、机玻璃缺氧舱(27cmX15cmX15cm),麻醉机、多功能监护仪、测氧仪、压缩氧气源和氮气源、气体传输管道等部分组成。调节氧气、氮气流量，输出不同02体积分数的氮氧混合气体，使总气流量为2〜3L/mino缺氧吋舱内02体积分数维持在(6.5±0.1)%,七氟烷预处理时舱A02体积分数维持在(21.0±0.5)%。七氟烷浓度及02体积分数分别由多功能监护仪及测氧仪实时监测。将小鼠随机分为5组，每组10只：对照(control,C)组:置于敞开玻璃舱内；缺氧(hypoxia,H)组：向闭合舱内输入02体积分数为(6.5±0.1)