兽药残留检测中磺胺嘧啶elisa试剂盒的研制

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1、第１５卷第１期生物加工过程Ｖｏｌ?１５Ｎｏ?１２０１７年１月ＣｈｉｎｅｓｅＪｏｕｒｎａｌｏｆＢｉｏｐｒｏｃｅｓｓＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇＪａｎ．２０１７ｄｏｉ：１０?３９６９／ｊ?ｉｓｓｎ?１６７２－３６７８?２０１７?０１?０１１兽药残留检测中磺胺嘧啶ＥＬＩＳＡ试剂盒的研制１，２１１２２２田博，金坚，惠人杰，徐凤莲，吴涛，李伟（１?江南大学药学院，江苏无锡２１４１２２；２?无锡同昕生物技术有限公司，江苏无锡２１４０２８）摘要：以合成的耦联抗原ＢＳＡ磺胺嘧啶和磺胺嘧啶（ＳＤ）的单克隆抗体为材料，建立了ＳＤ间接竞争ＥＬＩＳＡ的方法。方法的检测灵敏度为０?２１３ｎｇ／ｍＬ，线性检测范

2、围为１?８４～５７?４１ｎｇ／ｍＬ，除与磺胺二甲嘧啶反应率超过１０％外，与其他磺胺类药物交叉反应率均低于１?５％，４℃放置１８０ｄ没有明显的变化。采用猪尿、牛奶、猪肉３类样本进行的添加回收实验，批内ＣＶ均小与１０％，批间ＣＶ小于１５％，平均添加回收率介于７５％～９０％。因此，组建的试剂盒可以满足动物饲养检测ＳＤ的要求。关键词：磺胺嘧啶；间接竞争ＥＬＩＳＡ；回收实验；交叉反应率中图分类号：ＴＳ２０１文献标识码：Ａ文章编号：１６７２－３６７８（２０１７）０１－００６９－０４Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｓｕｌｆａｄｉａｚｉｎｅｉｎｔｈｅｖｅｔｅｒｉｎａｒｙｄｒｕｇｓｒｅｓｉｄｕｅｂ

3、ｙｓｅｎｓｉｔｉｖｅＥＬＩＳＡ１，２１１２２２ＴＩＡＮＢｏ，ＪＩＮＪｉａｎ，ＨＵＩＲｅｎｊｉｅ，ＸＵＦｅｎｇｌｉａｎ，ＷＵＴａｏ，ＬＩＷｅｉ（１．ＳｃｈｏｏｌｏｆＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ，ＪｉａｎｇｎａｎＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｗｕｘｉ２１４１２２，Ｃｈｉｎａ；２．ＷｕｘｉＴｏｎｇｘｉｎＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙＣｏ．Ｌｔｄ．，Ｗｕｘｉ２１４０２８，Ｃｈｉｎａ）Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｕｓｉｎｇｉｎｄｉｒｅｃｔｃｏｍｐｅｔｉｔｉｖｅｅｎｚｙｍｅｌｉｎｋｅｄｉｍｍｕｎｏｓｏｒｂｅｎｔａｓｓａｙ（ＥＬＩＳＡ），ａｒａｐｉｄ，ｈｉｇｈｌｙｓｅｌｅｃｔｉｖｅａｎｄｅｘｔｒｅ

4、ｍｅｌｙｓｅｎｓｉｔｉｖｅｍｅｔｈｏｄｈａｓｂｅｅｎｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄｆｏｒｔｈｅｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｓｕｌｆａｄｉａｚｉｎｅ（ＳＤ）．ＴｈｅＳＤｄｅｔｅｃｔｉｏｎｌｉｍｉｔｗａｓ０?２１３ｎｇ／ｍＬｆｏｒｉｎｄｉｒｅｃｔｃｏｍｐｅｔｉｔｉｖｅＥＬＩＳＡｆｏｒｍａｔｓ，ｔｈｅａｓｓａｙｒａｎｇｅｓｆｒｏｍ１?８４ｔｏ５７?４１ｎｇ／ｍＬ，ｅｘｃｅｐｔｆｏｒｔｈｅｃｒｏｓｓｒｅａｃｔｉｖｉｔｙｗｉｔｈｓｕｌｆａｄｉｍｉｄｉｎｅｉｓｏｖｅｒ１０％，ｃｒｏｓｓｒｅａｃｔｉｏｎｗｉｔｈｏｔｈｅｒｓｕｌｆａｄｒｕｇｓｗｅｒｅｌｏｗｔｈａｎ１?５％，ａｎｄｔｈｅｒｅｗａｓｎｏ

5、ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｃｈａｎｇｅｕｎｄｅｒ４℃ｉｎ１８０ｄ．Ｔｈｅｗｉｔｈｉｎ⁃ｒｕｎａｎｄｂｅｔｗｅｅｎ⁃ｒｕｎＣＶｓｏｆｔｈｅＳＤ⁃ＥＬＩＳＡｗｅｒｅｌｅｓｓｔｈａｎ１０％ａｎｄ１５％，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．ＴｈｅｍｅａｎｒｅｃｏｖｅｒｉｅｓｆｒｏｍｔｈｅＳＤ⁃ｆｒｅｅｐｉｇｕｒｉｎｅ，ｍｉｌｋａｎｄｐｏｒｋｗｅｒｅ７５％ｔｏ９０％．ＴｈｅｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｔｈａｔｔｈｅＳＤ⁃ＥＬＩＳＡｍｅｔｈｏｄｃａｎｂｅａｐｐｌｉｅｄｔｏｄｅｔｅｃｔｔｈｅＳＤｃｏｎｔａｍｉｎａｔｉｏｎｉｎｆｏｏｄａｎｄａｎｉｍａｌｆｅｅｄ．Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ｓｕｌｆａｄｉａｚｉｎｅ；ｉｎｄｉ

6、ｒｅｃｔｃｏｍｐｅｔｉｔｖｅＥＬＩＳＡ；ｒｅｃｏｖｅｒｙｔｅｓｔ；ｃｒｏｓｓ⁃ｒｅａｃｔｉｏｎｒａｔｅ动物性食品中兽药和饲料添加剂的残留对环食品中磺胺嘧啶的最高残留限量为０?１ｍｇ／ｋｇ。目境和人体健康的危害已成为现在亟待解决的问题前，检测磺胺嘧啶残留的常用方法主要是高效液相［３］之一，其中，磺胺类药物特别是磺胺嘧啶（ＳＤ）、磺胺色谱法（ＨＰＬＣ）和酶联免疫吸附试验法［４－５］甲基嘧啶、磺胺二甲氧嘧啶和磺胺甲基异恶唑等作（ＥＬＩＳＡ），后者作为磺胺嘧啶残留检测方法，具为饲料添加剂或动物疫病治疗药物的不合理用药有适用于临床使用方便的优势。ＥＬＩＳＡ是一种应用在动物性食品中的残留已

7、受到国际社会的普遍关比较成熟的超微量定量分析方法，不仅通量适可、［１－２］注。我国以及美国、欧盟等国家规定了动物性简便易行而且经济，目前所用装备均已可以国产化收稿日期：２０１４－０３－１３基金项目：江苏省自然科学基金青年项目（ＢＫ２０１４０１３６）作者简介：田博（１９８７—），男，吉林农安人，研究方向：药物分析；金坚（联系人），教授，Ｅ⁃ｍａｉｌ：ｊｉａｎｊｉｎ＠ｊｉａｎｇｎａｎ．ｅｄｕ．ｃｎ７０生物加工过程第１５卷生产，能够适于基层单位普及应用。由于动物性食按ＳＤ标准品溶液梯度加入５０μＬ