elisa测定乳中磺胺甲基嘧啶残留

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1、中国兽医学报990221中国兽医学报CHINESEJOURNALOFVETERINARYSCIENCE1999年第19卷　第2期No.2vol.191999ELISA测定乳中磺胺甲基嘧啶残留*吴　定　张羽航**　姚汝华**摘要　以牛血清白蛋白(BSA)为载体，合成2种不同的物质的量的比值(约1∶13和1∶42)的磺胺甲基嘧啶抗原，并比较了两者的免疫原性；以卵白蛋白(OA)为载体，合成1种包被抗原；用辣根过氧化物酶标记羊抗兔IgG，工作浓度1∶1000；建立的乳中磺胺甲基嘧啶残留ELISA测定法，抗原亲和常数分别为1.28×107（

2、1∶42）和3.21×107(1∶13)，磺胺甲基嘧啶检测质量浓度为5～220μg/L(1.87×10－8～8.2×10－7mol/L)，检测限为2.4μg/L,回收率为88%～118%，与磺胺二甲基嘧啶和磺胺噻唑交叉率分别为6.0%和0.84%，与磺胺二甲氧嘧啶和磺胺脒无交叉反应。关键词　乳　磺胺甲基嘧啶　ELISA中图分类号　S854.43Enzyme-linkedImmunosorbentAssayonSulfamethyldiazineContentinMilkWuDing　ZhangYuhang*　YaoRuhua*　(

3、AnhuiAgrotechnical　　　　　TeachersCollege,Fengyang,Anhui233100)　　Abstract　TwokindsofthesulfamethyldiazineantigenweresynthesisedwiththecarrierproteinofBSAorOAandtheirimmunogenicitycompared;thesheepanti-rabbitγ-globulinwerelabelledwiththehorseradishperoxidase(HRP)according

4、tosodiumperiodatemethod;theELISAonsulfamethyldiazinecontentinmilkwasdeveloped.Affinityconstantoftheantibodywas1.28×107(themolecularmoleratioinantigenfor1∶42)and3.21×107(1∶13),respectively.ThedetectableconcentrationofsulfamethyldiazinewithELISArevealed5-220μg/L(1.87×10

5、-8-8.2×10-7mol/L)withthedetectionlimitbeing2.4μg/L,therecoveryrateof89%-118%,thecrossreactiveratewithsulfadimidineandsulfathiazoleof6.0%and0.84%,respectively,nocrossreactionwithsulfadimethoxineandsulfaguaniline.　　Keywords　sulfamethyldiazine;enzyme-likedimmunosorbentas

6、say;ELISA　　磺胺甲基嘧啶是治疗奶牛疾病和作饲料添加剂的常用药物之一。奶牛使用抗生素后，一般经72h就可挤乳出售［1］。但磺胺甲基嘧啶半衰期较长，72h后鲜乳中仍有微量残留［2，3］。食用含磺胺甲基嘧啶的牛乳，能导致过敏机体发生过敏性反应，破坏机体正常菌群生态平衡，引起致病菌产生耐药性［4］。乳中抗生素残留的测定一般采用TTC法和微生物抑制圈法，但不适合乳中磺胺药残留测定［5～7］。本研究在合成牛血清白蛋白-磺胺甲基嘧啶抗原和卵白蛋白-磺胺甲基嘧啶抗原，并在比较2种不同分子file:///E

7、/qk/zgsyxb/zgsy

8、99/zgsy9902/990221.htm（第1／5页）2010-3-2316:43:25中国兽医学报990221结合比偶合抗原免疫原性的基础上，建立了乳中磺胺甲基嘧啶残留的ELISA测定方法。1　材料与方法1.1　主要试剂与仪器　磺胺甲基嘧啶(SMD)(山东第四制药厂)、吡啶(上海化学试剂厂)、丁二酸酐(SA)(上海化学试剂厂)、1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)碳化二亚胺(EDC)(Merck公司)、N，N′-二甲基甲酰胺(上海化学试剂厂)、牛血清白蛋白(BSA)(上海生化所)、卵白蛋白(OA)(上海血研所)、辣根过氧化物酶

9、(HRP)(RZ>3.0，上海生化所)、羊抗兔IgG(天津生物制品研究中心)、硼氢化钾(Fluck公司)、过碘酸钾(上海试剂一厂)、3，3′，5，5′-四甲基联苯胺(Sigma公司)。　　UV-754型紫外可见分光光度计(上海第三分析厂)、DG-3