磺胺类总量elisa检测试剂盒说明书

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1、磺胺类总量ELISA检测试剂盒说明书一、概要本试剂盒是应用ELISA技术研发的新一代药物残留检测产品，与仪器分析技术相比具有快速、简便、准确和灵敏度高等特点，操作时间仅需1.5小时，能最大限度地减少工作强度和操作误差。二、试验原理本试剂盒采用间接竞争ELISA方法，在酶标板微孔条上预包被偶联抗原，样本中的残留物磺胺间甲氧嘧啶、磺胺嘧啶、磺胺甲噁唑、磺胺噻唑与微孔条上预包被的偶联抗原竞争抗三者的抗体，加入酶标二抗后，用TMB底物显色，样本吸光值与其所含磺胺类药物的含量成负相关，与标准曲线比较再乘以其对应的稀释倍数，即可得出样品中磺胺类药物的残留量。三

2、、适用范围可定性、定量检测动物组织（肌肉/肝脏/鱼/虾）、鸡蛋、蜂蜜、牛奶、血清等样品中磺胺间甲氧嘧啶（SMM）、磺胺嘧啶（SD或SDZ）、磺胺甲噁唑（SMZ）、磺胺噻唑（ST）药物的残留量。四、交叉反应率磺胺嘧啶（SD或SDZ）……………………………100.0%磺胺间甲氧嘧啶/磺胺六甲氧嘧啶（SMM）……98%磺胺甲噁唑（SMZ）…………………………………120.0%磺胺噻唑（ST）………………………………………98.0%酞酰磺噻唑（PST）…………………………………62.8%磺胺甲噻二唑……………………………………103%磺胺吡啶…………………

3、…………………………51.9%磺胺对甲氧嘧啶……………………………35%五、使用单位需自备的设备及试剂设备：┅┅微孔板酶标仪450nm/630nm┅┅旋转蒸发仪/氮气吹干装置┅┅均质器振荡器、洗耳球、容量瓶：500ml┅┅涡旋仪、离心机┅┅天平：感量0.01g┅┅刻度移液管：10ml┅┅玻璃试管：15ml┅┅聚苯乙烯离心管：50ml┅┅玻璃离心管：10ml┅┅微量移液器：单道20ml～200ml、200ml～1000ml多道250ml试剂：----乙腈(分析纯)（动物组织专用）----乙酸乙酯(分析纯)----正己烷(分析纯)----十二水合磷酸氢

4、二钠(分析纯)----二水合磷酸二氢钠(分析纯)----氢氧化钠(分析纯)----浓盐酸----去离子水六、提供的材料与试剂1、96孔酶标板×1块（包被有偶联抗原）2、标准液×6瓶：（1ml/瓶）0ppb，2ppb，4ppb，8ppb，16ppb，32ppb3、高浓度标准品：（1ml/瓶）1ppm4、酶标二抗12ml……………………红色帽5、抗体工作液10ml……………………绿色帽6、底物液A液7ml……………………白色帽7、底物液B液7ml……………………红色帽8、终止液7ml……………………黄色帽9、20×浓缩洗涤液40ml………………………透

5、明帽10、20×浓缩提取液50ml………………………蓝色帽七、溶液的配制配液1:0.02M磷酸盐缓冲液称取5.36g十二水合磷酸氢二钠、0.2g二水合磷酸二氢钾、8g氯化钠和0.2g氯化钾加去离子水溶解定容至1L配液2:0.5M盐酸溶液量取41.7ml浓盐酸加去离子水定容至500ml配液3:0.2M氢氧化钠称取4g氢氧化钠加去离子水定容至500ml配液4:提取工作液用去离子水将20×浓缩提取液按1：19体积比进行稀释（1份20×浓缩提取液+19份去离子水）用于样本的提取，提取工作液在4℃环境可保存一个月。配液5:洗涤工作液用去离子水将20×浓缩洗涤

6、液按1：19体积比进行稀释（或按需量稀释）（1份20×浓缩洗涤液+19份去离子水）用于酶标板的洗涤，洗涤工作液在4℃环境可保存一个月。八、样本前处理步骤样本处理前须知处理任何样本时，都必须注意：（a）实验中必须使用一次性吸头，在吸取不同的试剂时要更换吸头。（b）实验之前须检查各种实验器具是否干净，必须使用洁净实验器具，以避免污染干扰实验结果（c）所有样本复溶后均不能保存(一)高检测限样本（a）动物组织（鸡肉、鸡肝、猪肉、猪肝、鸡蛋）┅┅用均质器均质组织样本；┅┅称取2.0±0.05g均质物至50ml聚苯乙烯离心管中，加入8ml乙腈，立即用振荡器振荡

7、20min，3000g以上离心5min；┅┅取上清液2ml至10ml干净的玻璃试管中，于50～60℃水浴氮气流下吹干；┅┅加入1ml正己烷用涡旋仪涡动20s溶解干燥残留物，加入1ml0.02M磷酸盐缓冲液（见配液1），用涡旋仪涡动1min，3000g以上离心10min；┅┅除去上层正己烷相，取下层水相20ml用于分析。（b）动物组织（鱼、虾）┅┅用均质器均质组织样本；┅┅称取2.0±0.05g均质物至50ml聚苯乙烯离心管中，加入2ml去离子水，用涡旋仪涡动至糊状，加入8ml乙腈，立即用振荡器振荡20min，3000g以上离心5min；┅┅取上清液

8、2.5ml至10ml干净的玻璃试管中，于50～60℃水浴氮气流下吹干；┅┅加1ml正己烷用涡旋仪涡动20s溶解干燥残留物，