er2ccr3aysgg激光制备v类洞对兔牙髓组织学与热休克蛋白70表达的影响

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1、英文缩略语5·论文·Er．Cr：YSGG激光制备V类洞对兔牙髓组织学及热休克蛋白70表达的影响刖罱从红宝石激光到现在的Er,Cr：YSGG激光，随着研究的深入进展，激光在口腔临床治疗中的优点愈发受到人们的重视，其在临床治疗中的应用也愈发广泛。激光去腐备洞的原理是激光产生的能量传递到同轴的空气．水混合物中，激活了水雾和组织中的羟基，由于Er,Cr：YSGG激光的波长接近水的吸收峰值，雾化水滴高效率吸收激光能量并扩张加速形成微小的高速颗粒而产生微爆炸，致使无机物以微爆炸的方式被去除从而切割牙体组织，由于激光能量大部分转化为水分子的动能，较

2、少被牙体组织吸收，从而避免了激光能量在牙体组织内的过度积聚，减小了对牙髓组织的热效应。同时激光还具有噪声小、振动小，安全无痛等优点，在治疗过程中也无需与组织接触，降低了交叉感染的可能性。鉴于此，美国食品药物管理局(FDA)先后批准了Er,Cr：YSGG激光应用于牙体硬组织的治疗、根管治疗、口腔骨组织和牙周病的治疗等。Er,Cr：YSGG激光切割牙体硬组织，相较于普通涡轮牙钻，其切割面无玷污层熔融，釉柱结构清晰，清洁而粗糙的工作面提高了与充填材料的粘接性【l、2J，而涡轮牙钻切削牙本质产生的玷污层可进入牙本质小管形成管塞进而影响充填体与

3、牙体组织的结合力。经电镜观察，激光预备后的工作面清洁无玷污层，并呈现不规则鳞片状或波浪状外观，牙本质小管口呈开放状态，而管周牙本质突为袖口状，有利于在充填过程中树脂突的形成，从而增强与复合树脂材料的粘接力【3J，酸蚀剂在去除玷污层的同时还会对牙髓组织产生刺激，Er,Cr：YSGG激光能有效去除玷污层并且对牙髓组织无刺激。激光对组织的作用主要是光致热作用，Er,Cr：YSGG激光功率设定为4W时去除腐质效率较高，牙表面偶可见微小裂隙但未出现熔融现象及炭化等热损伤【4】，而在离体牙上进行实验观察髓腔温度发现，当激光工作功率调至6W时，髓腔

4、温度最高上升1．33士0．270C【5J，随着功率和照射时间的增加，髓腔温度呈上升趋势但其升温幅度均在安全的阈值范围内。6热休克蛋t刍(HSP)是细胞在应激状态下由特殊基因编码合成的蛋白质，能保护和促进细胞从生理和病理性刺激中恢复。HSP70为最重要的一族HSP，根据其氨基酸的一级结构HSP70可分为三个功能域：氨基端的ATP酶区，相对分子质量44ku，此区域高度保守且具有水解ATP的活性；羧基端的多肽结合区，分子质量约27ku，具有结合未折叠多肽的功能；近C端的功能不明区，为大小10ku的结构多变氨基酸序列。当细胞或组织处于应激状态

5、时，HSP70合成增加，一方面能使牙髓组织抵御冷、热、过大应力等急性刺激而保护细胞，另一方面能加快修复进程【6】。牙髓细胞受到热刺激后，HSP70表达升高并广泛参与到细胞骨架和核骨架中，与细胞结合使之迅速稳定，同时还能抑制应激酶激活，减少细胞凋亡，抑制氧阴离子生成，起到抗氧化的作用；HSP70的高表达还能促进碱性磷酸酶活性增强，而碱性磷酸酶在牙体组织发生及牙髓组织的修复等过程中发挥重要作用，这也提示HSP70有加速牙髓应激后修复的作用【71，同时HSP70作为分子伴侣的重要成员，参与牙髓应激修复过程中细胞内蛋白质合成过程及变性蛋白质的

6、清除。成牙本质细胞是牙本质形成的蛋白构建细胞，胞质中有大量RNA、蛋白质浓集，其与成纤维细胞分泌基质和胶原，维持牙髓正常功能，牙髓组织内成牙本质细胞、成纤维细胞HSP70的表达与这两种细胞重要的生理功能密切相关。本研究拟通过动物实验，利用免疫组织化学方法观察Er,Cr：YSGG激光备洞后热休克蛋白70的表达及分布特征，进一步了解Er,Cr：YSGG激光用于窝洞制备对牙髓组织的生物学效应及其安全性。材料和方法一、主要试剂与仪器兔抗人HSP70多克隆抗体(武汉博士德生物有限公司，武汉)，SABC免疫组化染色试剂盒即用型(武汉博士德生物有限

7、公司，武汉)，DAB显色试剂盒(武汉博士德生物工程有限公司，武汉)，速眠新II型注射液(长春军需大学兽医研究所，长春)，EDTA粉剂(鼎国昌盛生物技术有限责任公司，北京)，PBS粉剂(鼎国昌盛生物技术有限责任公司，北京)，4％多聚甲醛固定液(北京赛驰生物科技有限公司，北京)，苏木素、伊红(巴斯夫化工有限公司，天津)，Er，Cr：YSGG激光治疗机(Biolase公司，美国)，高速涡轮牙钻机(NSK公司，日本)，RM2135徕卡组织切片机(LEICA徕卡仪器有限公司，德国)，DH36001B电热恒温培养箱(天津泰斯特仪器有限公司，天津)

8、，BX40F4奥林巴斯光学显微镜(OLYMPUS奥林巴斯有限公司，日本)。二、主要试剂配制方法试剂名称配制方法0．1MPBS0．01M枸橼酸盐缓冲液IO％EDTA脱钙液伊红染液苏木素染液氯化钠8．5克，磷酸氢二钠2．8克