rho2frock通路在野百合碱诱导大鼠肺动脉高压中的作用及法舒地尔的干预

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1、Rho／ROCK通路在野百合碱诱导大鼠肺动脉高压中的作用及法舒地尔的干预．▲上·．JL‘翮吾肺动脉高压(pulmonaryarterialhypertension，PAll)指以肺动脉压力和肺血管阻力升高为特征的临床血流动力学症候群，以静息状态下平均肺动脉压(meanpulmonaryarterypressure，mPAP)持续高于25mmHg，或运动状态下mPAP持续高于30mmHg为诊断标准。根据病因和发病机制可分为五大类，其病理学表现主要以肺血管内膜增生、动脉中层肥厚、肺小动脉阻塞等丛样损害为主。PAH发病原因复杂，误诊率高，预后凶险，尤其是特发性

2、肺动脉高压(idiopathicPAH，IPAH)病情往往迅速恶化致右心衰竭甚至死亡，在诊断后的平均生存期为2．8年n3，目前确切发病机制尚未完全阐明，缺乏特效治疗。自20世纪50年代即开始对PAH进行的血流动力学及病理学等方面研究认为，肺血管收缩、肺血管重构(内皮细胞和平滑肌细胞增生、炎症、基质改变)和肺血管原位血栓形成是PAH发生发展的三个重要病理生理基础乜3，其中内皮功能障碍起关键作用，血管活性因子一氧化氮(nitricoxide，NO)和前列环素的生成障碍、血管收缩因子如内皮素一1(endothelin．1，ET．1)长时间过度表达及血管内皮生长

3、因子等在肿血管收缩、肺血管重构过程中发挥重要作用。近年来Rho／ROCK信号转导通路在PAIl发病中的作用逐渐被重视。Kitazono等船3发现，在自发性高血压大鼠模型的血管病灶处ROCK活性增加，且伴动脉平滑肌细胞Ca2+通道的活化。而运用ROCK抑制剂Y．27632可以纠正多种动物模型的高血压，长期使用ROCK选择性抑制剂法舒地尔(f弧udil)还能改善动脉中膜增厚与血管周纤维化程度，提示Rho／ROCK介导的信号转导通路在高血压的发病机制中具有重要意义，并且它可能是通过增加平滑肌细胞的Ca2+敏感性来发挥作用的H1。ca2+依赖的肌球蛋白轻链激酶(

4、myosinlightchainkinase，MLCK)介导的肌球蛋白轻链(myosinlightchain，MLC)磷酸化是血管平滑肌细胞收缩的主要触发因素，而Rho／ROCK通过抑制肌球蛋白轻链磷酸酶(myosinlightchainphosphatase，MLCP)介导ca2+敏感性收缩在收缩的持久阶段更为重要啼刊。Rho／ROCK信号转导通路能通过破坏内皮型一氧化氮合成酶(endothelial．9typenitricoxidesynthase，eNOS)mRNA的稳定性，介导低氧诱导的PAH大鼠肺组织中eNOS表达的向下调节，导致NO合成减少，

5、肺血管收缩增强，肺动脉压升高。师桃等研究n们结果中显示正常人肺组织中eNOS大量表达，而PAH患者肺血管内皮细胞内的eNOS表达明显减少，且eNOS的表达与mPAP、PAH病理分级及肺血管的形态学改变呈负相关。Stendd等n蛆报道了eNoS基因缺乏可造成大鼠肺高压模型，亦说明了这一点。另有研究表明，ROCK可促进前内皮素一1原(preproET．1)的基因转录而对preproET．1的表达进行正调节。曾真等n21研究表明肺循环血流增加后内源性内皮素一I(ET-1)和一氧化氮(NO)改变是一个复杂过程，preproET．1mRNA表达增加与肺动脉血压增高

6、和右心室肥厚并存。综上所述，Rho／ROCK信号转导通路可能通过直接影响平滑肌细胞收缩、改变内皮衍生舒张因子(NO)与收缩因子(ET．1)之间平衡和促进肺血管重构等机制在肺动脉高压的发病中起重要作用。法舒地尔是ROCK选择性抑制剂，是一种异喹啉磺胺衍生物，目前国外研究表明法舒地尔不仅可明显降低肺动脉高压实验动物的肺动脉压力，对体循环压力影响较小，而且可逆转肺动脉高压中肺血管的重构，国内法舒地尔用于肺动脉高压的治疗方面研究的相关报道较少，因此ROCK抑制剂可为肺动脉高压的药物治疗开辟新的思路，ROCK有望成为肺动脉高压治疗的新靶点。10材料和方法一、材料(

7、一)实验动物：清洁级健康SD雄性大鼠84只，8周龄，体重250-一3009，购自上海斯莱克实验动物有限责任公司(许可证号：SCXK沪2007-0005)，饲养于福建省立医院动物实验室(许可证号：SYXK闽2005--0010)。(二)药品及试剂：1、药品：野百合碱(美I雪Sigma公司)；盐酸法舒地尔注射液(依立卢)(日本旭化成制药株式会社惠赠，进口药品注册证号：H20050331，进口药品注册标准：JX20040247)；地尔硫卓(合贝爽)(天津田边制药有限公司，国药准字J20040065；进口药品注册证号BH20040175，进口药品注册标准JX20

8、000398)。2、试剂：(1)、免疫组化试剂小鼠抗人ROCK．I单克隆抗体(S