activin+b通过jnk和erk信号通路调节bmscs促进皮肤伤口的愈合

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1、博士学位论文IllIJIllIllIIIIIIIIIIY2257532ActivinB通过JNK和ERK信号通路调节BMSCs促进皮肤伤口的愈合博士研究生：孙丽指导教师：张琳教授摘要皮肤创伤愈合是一个复杂的生物学过程，它启动一系列复杂的生物学事件，包括炎症、组织新生及组织重构【11。虽然许多研究采用不同的方法治疗皮肤创伤修复，但愈合质量低、附属器官不可再生等依然是皮肤创伤愈合过程中的关键问题。目前，皮肤移植是修复大面积皮肤损伤的最有效方法。其中，应用骨髓间充质干细胞(Bonemesenchymalstemcells，BMSCs)治疗重症皮肤创伤展现出良好的应用前景。已有

2、研究结果证实BMSCs在促进创面愈合方面起到积极的作用。Badiavas将骨髓间充质干细胞移植到深II度烧伤创面，发现其明显促进创面的愈合【2】。付小兵等将BMSCs移植至猪深度烧伤创面，发现创面愈合速度明显加快，表皮增厚，真皮神经纤维增多，大大改善了创面愈合质量131。文献报道BMSCs还参与表皮、汗腺及创面血管的重建【4】。这些研究结果表明BMSCs是非常好的皮肤组织工程种子细胞。创伤愈合的各个阶段都有生长因子的参与和调控，生长因子对治疗慢性难愈合皮肤创口和大面积烧伤创面有着广阔的应用前景151。活化素(Activin)是转化生长因子-p(transformingg

3、rowthfactorp，TGFp)超家族成员，成熟组织内，Activin信号可调节伤口愈合和表皮再上皮化，在皮肤创伤愈合过程中具有重要的作用【6】。而且Activin和其拮抗剂卵泡抑素(Follistatin)共同调节毛囊的发育和周期循中文摘要环【71。课题组前期研究发现ActivinB在Invitro水平上通过JNK／MAPK信号通路促进角朊细胞的迁移，从而加速创伤修复过程【8,9,10]；近期研究显示：在Invivo水平上，ActvinB通过RhoA．YNK—cJun信号通路调节伤口愈合，并且在毛囊的再生和毛囊细胞的增殖方面起着关键的调控作用【ll】。干细胞从定居

4、的部位进入到相应的组织器官内才能实现该部位的再生和修复，而细胞迁移的过程是受趋化因子／趋化因子受体系统所调控的【12,13】。在创伤愈合的过程中，Activin／TGF．p是趋化因子之一，可以通过不同的方式作用于炎症及修复细胞，调节细胞的趋化性迁移、增殖分化和细胞外基质合成与分泌【141。研究发现BMSCs表面高度表达Activin受体，而且Activin／TGF．p通路下游信号分子Smad3的缺失导致BMSCs迁移能力降低【15'16'171，提示Activin／TGF．p信号可能在调控BMSCs的生物学功能上发挥重要作用，因此鉴于BMSCs能加速创伤愈合并促进皮肤血

5、管及汗腺等组织的再生，而ActivinB能促进BMSCs的迁移，我们假设ActivinB可能改善了BMSCs介导的创伤修复，为了验证假设我们提出将ActivinB和BMSCs联合起来，观察其治疗创伤愈合的作用，并在细胞水平上探索其可能的信号机制。本研究为临床治疗创伤修复提供了新的理论及实验依据。一、ActivinB联合BMSCs促进大鼠皮肤创伤愈合(一)目的探讨ActivinB联合BMSCs对治疗大鼠皮肤创伤愈合的影响。(二)方法24只健康成年SPF级SD大鼠随机分为四个组：PBS对照组，BMSCs组，ActivinB组和ActivinB联合BMSCs组。10％水合氯醛

6、(0．003ml／g)腹腔注射麻醉，SD大鼠背部两侧剪毛后用蜂蜜脱毛冻蜡脱毛，制作面积为lcm2正方形切口，深达皮下。术后动物自由进食、水。术后每天用细Mark笔将各组未愈合创面面积描记在透明薄膜上，利用数码相机在相同的条件下对描记下的图像拍照，IPP图像分析系统计算未愈合创面面积，计算创面愈合率，愈合率=(原始创面面积一未愈合的创面面积)／原始创面面积×100％。术后3d、7d、14d、21dH博士学位论文取伤口周围0．5cm皮肤，PBS冲洗，4％多聚甲醛固定，PBS冲洗，乙醇逐级脱水，二甲苯透明，石蜡包埋。切片(5岬)，二甲苯脱蜡，乙醇逐级复水，常规的苏木精伊红(h

7、ematoxylinandeosin，H&E)染色。(三)结果与ActivinB、BMSCs组及PBS组相比，ActivinB联合BMSCs组可以显著促进SD大鼠皮肤创面愈合，移植后第7d、14d，ActivinB联合BMSCs组创面愈合率显著高于ActivinB、BMSCs组及PBS组。移植后第12d，ActivinB联合BMSCs处理组的12个创口(戚)已完全闭合，而ActivinB、BMSCs组及PBS组伤口尚未完全闭合。ActivinB组和BMSCs组于移植后14d仓,J面完全愈合，而PBS组创面完全闭合发生于第16d。第14dH