ngf通过pi3kakt-rac1-jnk和erk信号通路促进真皮成纤维细胞迁移而加速皮肤伤口愈合

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1、万方数据温州医科大学硕士学位论文论文题目：丛Q￡通过￡!三K丛照：＆堑!：坠Ⅸ塑星丛信曼通路论文答辩日期：2Q!垒生§旦!鱼旦万方数据温州医科大学硕士学位论文目录【IIIIIillIIIIIIIIIlib11111IIIIILIItlIIIY2691443缩略词表⋯．．⋯⋯⋯．．⋯⋯⋯⋯．．．．⋯⋯．．．⋯⋯．1中文摘要⋯⋯．⋯．．．．⋯．．．．．．．．．．．⋯⋯．．．．．．⋯⋯．．2英文摘要．．．．．．⋯．⋯．．．⋯．．．．．⋯⋯．．．．．．⋯．．⋯．．．．4引言⋯⋯⋯．．．．．．．．．⋯．．⋯．⋯⋯．．⋯⋯⋯．．．⋯．．7第一部分NG

2、F促进大鼠皮肤创面的愈合．．⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．9实验材料⋯⋯．．⋯．．．⋯⋯⋯．_⋯．．．．⋯．⋯⋯⋯⋯9实验方法⋯．．．．⋯⋯．．．⋯．．．⋯⋯⋯⋯⋯．．．．．．⋯．10结果⋯．．⋯⋯．．⋯⋯．⋯．⋯．．．．．．．⋯．．．⋯．．．⋯．．13分析与讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯17d、结⋯．．．．．．．⋯．．．⋯⋯．．．．．⋯⋯⋯⋯⋯．．．⋯⋯18第二部分NGF对人真皮成纤维细胞的影响⋯．．．．．．．⋯．．⋯．．19实验材料⋯．．．．⋯⋯．．⋯⋯⋯⋯⋯．．⋯⋯．．．⋯⋯19实验方法⋯．．．⋯．⋯⋯⋯．．．⋯⋯⋯⋯⋯．．．．．．⋯．20结

3、果．．．．．．⋯⋯．．．⋯．．．．⋯⋯．．．．．．．．．．．．⋯．．．⋯．．22分析与讨论⋯⋯⋯．．．．．⋯．⋯⋯⋯．．⋯．⋯．．．⋯⋯25，j、结⋯．．．．．．⋯．．⋯⋯．．⋯⋯⋯．．．．⋯⋯．⋯⋯⋯26全文总结⋯．．．⋯．⋯⋯．．⋯．．．⋯⋯．⋯⋯⋯⋯⋯．27参考文献一⋯．．．．．．⋯⋯⋯⋯⋯．．．．．．．．⋯⋯．⋯⋯28附录⋯⋯⋯．．⋯⋯⋯．．⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．．．⋯⋯．31致谢．．．．⋯⋯⋯．⋯⋯．⋯⋯⋯⋯．⋯⋯⋯⋯⋯．．32综述．．．．．．．⋯⋯⋯⋯．⋯⋯⋯⋯．⋯⋯．⋯⋯⋯．．．33万方数据温州医科大学硕士学位论文参考文献．．⋯⋯

4、．．⋯．．．．．．．．．．．⋯⋯．．．．．．．．．．．⋯．．．38学位论文独创性声明⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．42万方数据温州医科大学硕士学位论文缩略词表万方数据温州医科大学硕士学位论文NGF通过P13K／Akt-Rac1．JNK和ERK通路促进真皮成纤维细胞迁移而加速皮肤伤口愈合中文摘要目的：众所周知的神经营养因子，神经生长因子(NGF)无论是在动物创面模型还是在随机临床试验中都有促进皮肤伤口愈合的作用。但是，NGF促进皮肤创面愈合作用的具体机制并不是很清楚。本研究旨在通过NGF在大鼠皮肤切割伤口中的局部应用，观察其对伤口伤口愈合的影

5、响。研究表明真皮成纤维细胞在伤口愈合中起着重要的作用，可有效促进伤口愈合，固我们在此基础上对NGF对成纤维细胞的影响方面开展了进一步的研究。方法：1．动物模型建立雌性大鼠，用10％水合氯醛(3．5ml／kg)腹腔注射麻醉，麻醉后固定于简易操作台，用剃毛机剃去老鼠背部的毛发，并用酒精和碘伏对其背部的皮肤进行消毒。采用同体对照的方法，用剪刀在其背部以脊柱为对称轴，做两个面积为2cm×2cm的急性创面，两个创面间距在1．5Gm以上。右边伤口给不同浓度的NGF，左边伤口给予等体积的生理盐水作为对照。老鼠随机分成三组：第一组NGF的量为10肛g；第

6、二组NGF的量为20肛g；第三组NGF的量为40嵋。隔天给药并测量伤口面积到第14天。在3d、7d、14d和21d处死大鼠，并取下伤口组织进行包埋切片。采用HE染色的方法检测组织形态学，用Masson染色的方法检测组织中胶原的产生，并用免疫组化法检测组织中CD68、VEGF、PCNA和TGF．131的表达。2．伤口愈合的评价本实验分别于2d、4d、6d、8d、10d、12d和14d量取伤口未愈合面积(用透明的纸画下伤口面积，再将画下的面积复印到坐标纸上，数格计算出面积)，计算比较伤口愈合率。伤口愈合率(％)=(开始时伤口面积．取材日伤E1

7、面积)／开始时伤口面积*100％3．人真皮成纤维细胞的分离提取从温州医科大学附属第二医院获取人包皮组织，4℃保存，带回实验室，用含有双抗的PBS清洗组织三次，接着用O．5％dispaseII浸泡过夜，除去表皮和皮下组织后将真皮组织剪碎放入干净的T25培养瓶中培养。采用MTT法和细胞划痕实验的方法分别检测NGF对成纤维细胞增殖和迁移的影响。再用Westernblot2万方数据温州医科大学硕士学位论文法检测成纤维细胞中P13K／Akt、JNK、ERK和Racl蛋白的表达。结果：1．伤口愈合率的统计显示NGF可以促进大鼠皮肤切割伤口愈合。2．H

8、E染色和Masson染色显示NGF可以促进伤口再上皮化、肉芽组织形成和胶原产生。3．免疫组化结果显示NGF可以提高伤lSl中CD68、VEGF、PCNA和TGF．131的表达。4．NGF不能促