转染il18基因对大鼠胶质瘤细胞的体内外抗瘤作用

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1、’中文摘要’lO经HE染色用显微镜观察肿瘤组织内血管的形成情况。结果：1经PA317／IL．18细胞培养上清转染和G418筛选后，9L／IL．18细胞能够稳定表达IL．18mRNA及IL．18蛋白；9L／IL．18细胞培养上清中Ⅱ．18的含量为112．oo±4．30ng／L，明显高于9L／LXSN和9L组(FO．05)；在ConA作用下，9L／IL．18细胞培养上清可诱导大鼠脾细胞分泌IFN．Y(28．43±1．81pg／m1)，且其水平明显高于9L／LXSN(12．56±0．85pg／m1)和9L细胞(10．

2、43±O．57pg／m1)，差异有统计学意义(正0．05)。2显微镜下观察，9L／IL．18细胞与9L／LXSN、9L细胞形态无明显差异，但是细胞增殖实验结果显示，9L／IL．18细胞在体外的增殖能力降低，与9L／LXSN和9L细胞相比，差异有统计学意义(序O．05)，9L／LXSN与9L细胞的体外增殖能力无明显差异(矿O．05)。3流式细胞分析结果显示，9L／IL．18、9L／LXSN和9L细胞表面MHCI类分子、MHCII类分子、CD80和CD86的表达无显著差异(础．05)；9L／IL．18细胞GO／G1

3、期、G2M期和S期细胞比例分别为59．70±2．02％、16．80±2．04％、23．70±3．12％；9L／LXSN细胞GO／G1期、G2／M期和S期细胞比例分别为49．30±2．07％、19．10±1．94％、31．60±2．10％；9L细胞GO／Gl期、G2M期和S期细胞比例分别为35．70±2．33％、15．80±2．10％、48．50±2．63％，前者与后两组相比，GO／G1期细胞增加，S期细胞减少，差异有统计学意义(．pO．05)。49L／IL．18、9

4、L／LXSN和9L细胞在大鼠颅内的成瘤率均为100％，但接种9L／IL．18细胞组大鼠的平均生存期(22．75±1．11天)长于接种9L／LXSN和9L组(分别为15．OO±O．91天和16．50±1．04天)(萨O．05)。5接种9L／m．18细胞组大鼠肿瘤组织中ⅫCI类分子、CD80和CD86表达率分别为(67．51±1．40％、12．5l±1．57％、6．95±0．56％)，均高于接种9L／LXSN细胞组(60．31±1．01％、6．77±0．86％、2．93±0．29％)和9L细胞组(61．08±0．4

5、6％、7．04±1．24％、3．06±0．28％)，差异均有统计学意义(胙O．05)，后两者间无统计学差异(矿0．05)；三组间MHCII类分子表达分别为3．76±0．26％、3．73±0．55％、4．87+0．67％无显著差异(p>O．05)。．6接种9L／IL．18细胞组大鼠外周血中CD8+T细胞百分比为32．30±2中文摘要2．22％，与接种9L／LXSN和9L细胞组(22．024-0．67％、22．344-0．76％)相比，显著增高(萨O．05)，CD4+T细胞百分比及CD4+／CD8+T细胞比值显著降

6、低(p<0．05)。7ELISA法检测结果显示，接种9L／IL．18细胞组大鼠外周血TGF．13水平(111．55±5．93ng／L)显著低于接种9L／LXSN(127．89+4．01ng／L)和9L细胞组(133．42±3．68ng／L)(萨O．05)。8接种9L／IL．18细胞组大鼠肿瘤组织内可见大量凋亡细胞，凋亡率为22．20-4-1．02％，而接种9L／LXSN及9L细胞组仅见少量凋亡细胞，凋亡率分别为5．704-0．32％、6．404-0．5l％，接种9L／IL．18细胞组大鼠肿瘤细胞的凋亡率明显高于

7、其他两组(萨0．05)。9接种9L／IL．18细胞组大鼠肿瘤组织内IL．18mRNA表达阳性，而接种9L／LXSN和9L组IL．18mRNA表达呈阴性；接种9L／IL．18细胞组大鼠肿瘤组织内Bax表达明显升高，Bcl．2、Fgf2表达降低。10接种9L／IL．18细胞组大鼠肿瘤组织内未见或少见新生血管的生成，而9L／LXSN和9L组肿瘤组织内新生血管显著增多。结论：1在体外，转染外源性IL．18基因对9L细胞形态及细胞表面CD80、CD86、ⅢCI、II类分子表达及细胞凋亡无显著影响；但抑制细胞增殖，并使G0

8、／G1期细胞增加，S期细胞减少。2在体内，m．18可通过上调肿瘤细胞表面CD80、CD86、MHCI类分子水平，增强肿瘤细胞抗原性及抗原递呈能力；可降低荷瘤鼠外周血TGF．13水平，提高CD8+T细胞比例，改善大鼠体内免疫抑制状态，提高免疫功能。．3IL．18可能通过增加荷瘤鼠肿瘤组织Bax的表达，降低Bcl．2的表达，促进肿瘤细胞凋亡；通过降低Fgf'2的表达抑制肿瘤组织新生血管的生