重组肿瘤相关抗原表达与检测其血清自身抗体诊断肺癌地研究论文

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1、博士学位论文重组肿瘤相关抗原的表达及检测其血清自身抗体诊断肺癌的研究专业名称：肿瘤学博士研究生：杨衿记指导教师：吴一龙教授摘要研究背景肺癌是目前全球最常见的恶性肿瘤之一，在发达国家及中国大城市的发病率已经上升为恶性肿瘤的第一位，病死率在城市人口恶性肿瘤死亡中居首位。肺癌总的5年生存率仅为14％，预后差的主要原因是缺乏有效的筛查和早期诊断手段。肿瘤释放蛋白质(tumorliberatedprotein，TLP)揭示了肿瘤的早期发展过程，部分TLP就是肿瘤相关抗原(tumorassociatedantigens，ThAs)。目前研究出来的肺癌TAAs包括CEA，NSE，

2、TPA(tissuepolypeptidespecificantigen，组织多肽特异性抗原)，Chromogranine，Chl25，CAl9-9和Cyfra21一l，这些血清肿瘤标志物(tumormarker，TM)的敏感性和特异性波动在50％---90％左右，即使联合使用，也难以提高敏感性和特异性，所以，迫切要求探索新的肺癌TM。研究显示人体免疫系统在肿瘤早期即对Thhs产生自身抗体(autoantibodies)，且抗体比抗原更稳定，浓度更高，在理论上诊断肿瘤的敏感性和特异性比抗原更佳，因此，通过检测血清自身抗体，有可能提供诊断肿瘤的新思路。证据显示，肺癌患

3、者血清里可检测到抗肿瘤的自身抗体如C-myc、p53、CyclinBl、p62、Koc、IMPl和Survivin等抗体，单个自身抗体的阳性率在15％～20％左右，7个抗体联合敏感性可达44％～68％。已发现NSCLC(non—small—celllungcancer，非小细胞肺癌)的几个自身抗体，经测评可以中文摘要作为该病的独立TM，如P53、annexinI、annexinII、NY—ESO-1、L—myc、C—myc和90K／Mac-2bindingprotein(M2BP)等抗体在NSCLC患者的阳性率分别为15％一30％、30％、33％、8％、10％、13

4、％和30％。有研究检测了NSCLC和SCLC(smallcelllungcancer，小细胞肺癌)患者P53、C—myc、HER2、NY—ESO-l、CAGE、MUCI和GBU4-5共6个自身抗体，发现SCLC自身抗体的阳性率为5％(NY—ESO--1)～36％(MUCI)，而NSCLC自身抗体的阳性率为10％(P53)～34％(MUCl)。每个抗体单独使用不尽人意。由于肺癌在细胞基因型和细胞表型上是一种高度异质性的疾病，可能需要一组TM方能达到临床应用所要求的敏感性和特异性。有研究显示运用NSCLC患者血清T7-噬菌体cDNA文库筛出5个自身抗体组合的自身抗体谱，

5、获得了90％以上的敏感性和特异性。虽然这种自身抗体谱比单一自身抗体有较大的进步，但SEREX(theserologicalanalysisoftumorantigensbyrecombinantcDNAexpressioncloning，重组cDNA表达克隆的肿瘤抗原血清学分析)方法筛选肿瘤抗原蛋白以检测血清自身抗体仍有不足：1)SEREX筛选应用噬菌体做蛋白表达文库，表达抗原未能进行有效的翻译后修饰，不能被抗糖蛋白的抗体识别；2)表达文库中含有的cDNA序列，以lkb以下的序列为主，表达的仅是蛋白片段，而且由于开放阅读框(openreadingframe，ORF)

6、的移位等原因，出现很多错误表达蛋白。3)建库时大量mRNA未能转化成cDNA序列，造成蛋白表达不完全，可能使部分有用的抗体漏检，发现的抗原种类受到限制。因此，为提高血清自身抗体的敏感性和特异性，可假设在肺癌TAAs的质和量上寻找突破口：1)增加用于筛选血清自身抗体的抗原基因数量。由于基因组学和蛋白质组学的飞速发展，特别是基因芯片和质谱技术在肿瘤研究中的应用，人们对于肿瘤的基因表达以及肿瘤抗原的组成已经积累了大量的文献和数据，应用检索医学文献的方法分析肺癌的抗原基因表达谱成为可能。本研究探索居于已发表的肺癌基因芯片和抗原表达结果的文献分析，获得TAAs基因的初步医学证

7、据，突破单一SEREX法获得的抗原数量限制。2)提高用于检测肿瘤抗原蛋白的质量。针对原核表达(无翻译后修饰)、非全长蛋白和错误翻译等缺陷，本H博士学位论文研究尝试应用麦胚连续交换无细胞快速蛋白质翻译系统(Rapidtranslationsystemofwheatgermcontinuousexchangecell—free，RTSWheatGermCECF)，该系统是真核翻译，表达出来的蛋白质在翻译后修饰方面远较原核表达复杂，更加接近人体的情况。利用这些蛋白检测血清自身抗体有可能提高诊断肺癌的敏感性和特异性。国内外目前还没有关于基于医学文献证据的TARs基因在R