ny-eso-1单克隆抗体制备、鉴定及初步的应用

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1、军事医学科学院研究生学位论文独创性声明秉承军事医学科学院严谨的学风和科研作风，本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下独立进行的研究工作和取得的研究成果，除了文中特别加以标注和致谢之处外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得呈主匡堂盘鲎睦或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。论文作者签字：i!】＆盔签字日期：塑垡年—L月j生日军事医学科学院研究生学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解星空堕生盟堂窿有关保留、使用学位论文的规定。特

2、授权芏室匡堂登堂堕可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存，汇编以供查阅和惜阅。同意将本学位论文的复印件和磁盘送交国家有关部门和机构。(保密学位论文在解密后适用本授权书)论文作者签字j童!l＆毒签字日期：芝』年—上月上生日指导教师签字签字日期：盥丝‘年—￡月—趾日呈皇堕兰型堂堕堡主兰些笙!L缩略词表英文缩写英文全称中文对照AmpAmpicillin氨苄青霉素BCABicinchoninicAcid二喹啉甲酸BSACVDCDMSODTHELISAFCSFPLCGSHGSTHEPESHRP口TG

3、LBMcAbNBSNSCLCBovineSerumAlbuminColumnVolumeDendriticCelldimethylsulfoxideDelayedtypehypersensitivityEnzyme—LinkedlmmunosorbentAssayFetalCalfSerumFastProteinLiquidChromatographyGlutathioneS—transferaseN一2一hydrexyethlpiperazine—N．thaneSulfateacidHorseradishPeroxidaseIsopropy

4、lthio一8一D—galactosideLuria—BertanimediumMon。ClonalantibodynewbornbovineserumNon—smallCellLungCancer牛血清白蛋白柱床体积树突状细胞二甲基亚砜迟发型超敏反应酶联免疫吸附试验胎牛血清快速蛋白液相层析谷胱甘肽谷胱甘肽S一转移酶羟乙基哌嗪乙硫磺酸辣根过氧化物酶异丙基硫代一B—D一半乳糖苷酶LB培养基单克隆抗体新生牛血清非小细胞肺癌ODopticaldensity光密度值兰里垦兰型兰堕堡主兰些!垒!L英文缩写英文全称中文对照PBSPhosphate—buf

5、feredsaline磷酸盐缓冲液PAGEP。1yacrylrnjd8(烈聚丙烯酰胺凝胶电泳ElectrophoresisReverseRT-PCRSDSTCCTranscription—PolymeraseChain逆转录聚合酶链式反应ReactionSodiumDodecylSulfate十二烷基磺酸钠transitionalcellcarcinoma转移上皮细胞癌rpmroundperminute每分钟转数2军事医学科学院硕士毕业论文NY．ESO．1的单克隆抗体制备、鉴定及初步应用(中文摘要)目的：在恶性肿瘤特异性诊断治疗中，广谱癌基因

6、以其潜在的应用价值成已成为应用研究热点。在诊断应用中，利用单克隆抗体检测肿瘤特异抗原成为临床诊断的重要组成部分，同时应用肿瘤特异性抗原激活抗原提呈细胞进行免疫治疗，也正在成为重要的肿瘤辅助治疗手段，肿瘤抗原已经成为目前的研究热点。NY—ES0一l抗原是近年发现的一种肿瘤特异性抗原，属于癌症睾丸抗原(cancer-testisantigen，CTA)家族。NY—ESO—l，在正常组织只表达于睾丸、胎盘(这些组织由于不表达MHC—I类分子，不能成为免疫攻击的目标，属于免疫特权部位能得以免疫豁免)，在肿瘤组织中NY—ESO．1抗原广泛表达。我们通过

7、基因克隆制备人NY—ESO．1全基因，并将其构建于表达载体PGEX一4T-2中，得到重组表达载体PGEX4r_2／NY_ES0—1，将PGEX-4T-2／NY-ESO—l转化大肠杆菌BL21后进行诱导表达，得到的融合蛋白经纯化后进行动物免疫，制备多克隆抗体，通过建立NY-ESO．1单克隆抗体杂交瘤细胞系，制各抗NY-ESO一1单克隆抗体，确定其免疫学特性后，用于检测NY-ESO一1在乳癌中的表达，判断NY-ESO—l与乳癌的发生发展之间的关系。方法：将人黑色素瘤NY-ESO—l重组表达载体PGEX一4T-2／NY-ESO-1(本室保存)转化的

8、BL21大肠杆菌，通过IPTG诱导表达后，获得可溶性融合蛋白。融合蛋白经谷胱甘肽一S一转移酶亲和层析柱纯化，免疫Balb／c小鼠。用传统方法进行细胞融合后，采用本室