新生山羊小肠上皮细胞系的建立

《新生山羊小肠上皮细胞系的建立》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、新生山羊小肠上皮细胞系的建立研究生：匡伟导师：赵国琦教授(扬州大学动物科技学院，225009)摘要动物细胞和组织培养已经被广泛的运用于细胞和分子生物学领域，其中更多的应用于细胞分化机制的研究。小肠是食物进行消化吸收的主要场所，而小肠黏膜上皮细胞(Intestinalepithelialcells，IEC)是肠道主要的功能细胞，参与肠道食糜的消化、吸收、免疫屏障和应激反应等，并与肠道的内、外分泌功能有密切关系。因此，进行小肠上皮细胞的分离培养是研究小肠功能、病理、分化，营养物质吸收机制及其调控的主要手段之一。本试验使用了组织块和酶消化等

2、多种方法分离新生山羊小肠上皮细胞，结果发现组织块培养可以分离纯化出增殖能力较强的小肠上皮细胞，通过刮除等方法纯化获得纯的上皮细胞系，并稳定传代至12代。300U／ml胶原酶Ⅺ和O．1mg／mI中性蛋白酶I联合使用可获得完整的绒毛隐窝单位，其中的上皮细胞结构完整，24h内贴壁，增殖能力较强，48h内形成明显的集落。但传代后细胞难贴壁，增殖能力明显下降。0．25％胰蛋白酶和胶原酶I消化获得的细胞大多为成纤维细胞，大部分细胞无法贴壁。50肛g／ml嗜热菌蛋白酶消化所得的消化液二次贴壁后，可获得增殖能力较强的上皮细胞，但是传代后细胞难以贴壁，

3、增殖能力明显减弱。本试验采用MTT显色法定量研究了不同浓度的FBS(0％-t0％)、Gin(扣8mmol／mL)、EGF(O～20ng／mL)和胰岛素(0-20gg／mL)对新生山羊IEC生长的影响，研究发现其他营养条件一致，FBS为10％，Gln浓度为2mmol／mL，EGF浓度为10ng／mL，胰岛素浓度为5肛g／mL分别培养时，IEC的生长最为迅速。试验中采用了两种冻存液对获得的山羊IEC进行冷冻保存，发现冻存液中添加葡聚糖对冻存的山羊IEC具有保护作用，能显著提高冻存细胞的存活率。关键词小肠上皮细胞，分离，培养，冻存复苏，山羊

4、EstablishmentofIntestinalEpithelialCellLinefromNeonatalGoatAdvisor：Prof．ZhaoGuoqiCollegeofAnimalScienceandTechnology,YangzhouUniversity,225009ABSTRACTAnimalcellandtissueculturehasbeenwidelyusedincellbiologyandmolecularbiology,especially0flthestudyofmechanismofcellditier

5、entiation．Smallintestineisthemainplacefordigestionandabsorptionofnutrient．Intestinalepithelialceils(IEC)atetheprimaryfunctionalcellsinintestinaltract．Besidesparticipatingindigestion,absorption,immunizationbarrierandstressreaction，IECsarecloselyrelatedtosecreteryfunction

6、intemalandexternalintestine．AsaresuIt,isolationandcultureofintestinalepithelialcelBiSoneofmajormeanstOstudyonintestinefunction,pathologyandcelldifferentiation，nutrientabsorptionandregulatorymechanism．BothmethodsofexplantcultureandenzymaticdigestionwereUSedinthisstudytos

7、eparateepithelialeelIsfromintestineofneonatalgoat．nleresultshowedthattheviableepithelialeelIswhichhavehighcapaciVyofproliferationCanbeobservedbymeansofexplantculturemethod．Andtheepithelialcelllinecanbeobtainedthroughscraping,whichcouldpassageupto12generationsteadily．Iso

8、lationofepitheliaandpreservationofitsintegrityWaswellachievedbyusingcollagenase(300U／m1)／dispase(0．1mg／m1)dige