稳定表达山羊SLAM受体的BHK-21细胞系的建立及应用.pdf

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1、第37卷第7期中国预防兽医学报Vo1．37．No．72015年7月ChineseJournalofPreventiveVeterinaryMedicineJu1．20l5doi：10．3969~．issn．1008—0589．2015．07．05稳定表达山羊SLAM受体的BHK一21细胞系的建立及应用张家林，李翠翠，谢梅梅，王子龙，陈伟业，步志高(中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室，黑龙江哈尔滨150001)摘要：信号淋巴激活分子(SLAM)又称为CD150，是小反刍兽疫病毒(PPRv)和犬瘟热病毒(CDV)等麻疹病毒属病毒感染淋巴细胞

2、的主要受体，在病毒侵入细胞中发挥重要作用。为建立稳定表达山羊SLAM(gSLAM)的真核细胞系，本研究将人工合成的gSLAM基因克隆至真核表达质粒plRESpuro3中，并在该基因的3端引入Flag标签序列作为分子标记，构建了重组质粒pIRES3．gSLAM。将该重组质粒转染BHK．21细胞，经嘌呤霉素加压筛选及采用表达绿色荧光蛋白(GFP)的重组PPRv病毒(rPPRV／GFP)感染鉴定后，筛选到稳定表达gSLAM基因的细胞系。rPPRV／GFP感染和westernblot鉴定表明，无论是否有嘌呤霉素压力的存在，该细胞系在传代至第20代，仍能稳定表达gSL

3、AM蛋白。由于gSLAM氨基酸序列与犬的同源性较高，以表达GFP重组CDV强毒株(rCDV／GFP)感染该细胞系，病毒可以感染且能形成明显的细胞病变，表明该细胞系可用于CDV强毒分离和致弱机制等相关研究。关键词：信号淋巴细胞激活分子；BHK-21细胞；小反刍兽疫；犬瘟热；病毒分离中图分类号：$852．65文献标识码：A文章编号：1008．0589(2015)07．0506．04TheestablishmentandapplicationofBHK一21expressinggoatSLAMZHANGJia—lin，LICui—cui，XIEMei—mei，WA

4、NGZi—long，CHENWei-ye，BUZhi—gao(StateKeyLaboratoryofVeterinaryBiotechnology，HarbinVeterinaryResearchInstitute，ChineseAcademyofAgriculturalSciences，Harbin150001，China)Abstract：Signalinglymphocyteactivationmolecule(SLAMorCD150)isthemajorreceptorforMorbillivirussuchaspestedespetitsrumi

5、nantsvirus(PPRV)andcaninedistempervirus(CDV)toinfectthelymphcells．InordertoestablishthecelllinestablyexpressinggoatSLAM(gSLAM)，thegSLAMgenewassynthetizedartificiallyandclonedintotheplRESpuro3togeneratetherecombinantplasmidofplRES3一gSLAM．Then，thecelllinestablyexpressinggSLAM(BHK—gSL

6、AM)wasestablishedbytransfectionofBHK·21cellwithplRES3-gSLAMscreeningunderpuromycinpressureandidentifiedbyinfectionwithrecombinantPPRVexpressingGFP(rPPRV／GFP)．Inaddition，thecelllinestablyexpressinggSLAMat20passageseitherwithorwithoutthepuromycinselectionpressureverifiedbyrPPRV／GFPin

7、fectiontestandwesternblot．Furthermore，therecombinantvirulentCDVexpressingGFPwasalsoabletoinfecttheBHK—gSLAMandreplicatedinthecelllinedetectedbyGFPexpression．TheseresultssuggestedthattheBHK-gSLAMwasapermissivecelllineforbothrPPRVandCDV．whichwouldfacilitatefuturestudyoftheviralinfect

8、ionmechanism．Keywords：sign