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《稳定表达山羊SLAM受体的BHK-21细胞系的建立及应用.pdf》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、第37卷第7期中国预防兽医学报Vo1.37.No.72015年7月ChineseJournalofPreventiveVeterinaryMedicineJu1.20l5doi:10.3969~.issn.1008—0589.2015.07.05稳定表达山羊SLAM受体的BHK一21细胞系的建立及应用张家林,李翠翠,谢梅梅,王子龙,陈伟业,步志高(中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室,黑龙江哈尔滨150001)摘要:信号淋巴激活分子(SLAM)又称为CD150,是小反刍兽疫病毒(PPRv)和犬瘟热病毒(CDV)等麻疹病毒属病毒感染淋巴细胞
2、的主要受体,在病毒侵入细胞中发挥重要作用。为建立稳定表达山羊SLAM(gSLAM)的真核细胞系,本研究将人工合成的gSLAM基因克隆至真核表达质粒plRESpuro3中,并在该基因的3端引入Flag标签序列作为分子标记,构建了重组质粒pIRES3.gSLAM。将该重组质粒转染BHK.21细胞,经嘌呤霉素加压筛选及采用表达绿色荧光蛋白(GFP)的重组PPRv病毒(rPPRV/GFP)感染鉴定后,筛选到稳定表达gSLAM基因的细胞系。rPPRV/GFP感染和westernblot鉴定表明,无论是否有嘌呤霉素压力的存在,该细胞系在传代至第20代,仍能稳定表达gSL
3、AM蛋白。由于gSLAM氨基酸序列与犬的同源性较高,以表达GFP重组CDV强毒株(rCDV/GFP)感染该细胞系,病毒可以感染且能形成明显的细胞病变,表明该细胞系可用于CDV强毒分离和致弱机制等相关研究。关键词:信号淋巴细胞激活分子;BHK-21细胞;小反刍兽疫;犬瘟热;病毒分离中图分类号:$852.65文献标识码:A文章编号:1008.0589(2015)07.0506.04TheestablishmentandapplicationofBHK一21expressinggoatSLAMZHANGJia—lin,LICui—cui,XIEMei—mei,WA
4、NGZi—long,CHENWei-ye,BUZhi—gao(StateKeyLaboratoryofVeterinaryBiotechnology,HarbinVeterinaryResearchInstitute,ChineseAcademyofAgriculturalSciences,Harbin150001,China)Abstract:Signalinglymphocyteactivationmolecule(SLAMorCD150)isthemajorreceptorforMorbillivirussuchaspestedespetitsrumi
5、nantsvirus(PPRV)andcaninedistempervirus(CDV)toinfectthelymphcells.InordertoestablishthecelllinestablyexpressinggoatSLAM(gSLAM),thegSLAMgenewassynthetizedartificiallyandclonedintotheplRESpuro3togeneratetherecombinantplasmidofplRES3一gSLAM.Then,thecelllinestablyexpressinggSLAM(BHK—gSL
6、AM)wasestablishedbytransfectionofBHK·21cellwithplRES3-gSLAMscreeningunderpuromycinpressureandidentifiedbyinfectionwithrecombinantPPRVexpressingGFP(rPPRV/GFP).Inaddition,thecelllinestablyexpressinggSLAMat20passageseitherwithorwithoutthepuromycinselectionpressureverifiedbyrPPRV/GFPin
7、fectiontestandwesternblot.Furthermore,therecombinantvirulentCDVexpressingGFPwasalsoabletoinfecttheBHK—gSLAMandreplicatedinthecelllinedetectedbyGFPexpression.TheseresultssuggestedthattheBHK-gSLAMwasapermissivecelllineforbothrPPRVandCDV.whichwouldfacilitatefuturestudyoftheviralinfect
8、ionmechanism.Keywords:sign
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