奶牛乳腺上皮细胞系的建立

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1、万方数据畜牧兽医学报2009，加(5)：743—747ActaVeterinariaetZootechnicaSinica奶牛乳腺上皮细胞系的建立陈建晖，佟慧丽，李庆章，高学军’(东北农业大学乳品科学教育部重点实验室，哈尔滨150030)摘要：采用组织块种植法，成功地培养了奶牛乳腺上皮细胞，并利用细胞角蛋白18的免疫荧光染色对乳腺上皮细胞进行了鉴定。通过对细胞接种存活率、群体倍增时间、生长曲线、形态学等生物学性状的检测，建立并鉴定了正常培养的奶牛乳腺上皮细胞系，细胞传至20代以上时仍保持旺盛的增殖活力。通过对细胞传代及反复冻存，建立了奶牛乳腺上皮细胞系，获得了大量的

2、乳腺上皮细胞。关键词：奶牛；乳腺上皮细胞；细胞系中图分类号：S823．91文献标识码：A文章编号：0366—6964(2009)05-0743—05EstablishmentofDairyCowMammaryGlandEpithelialCellLineCHENJian-hui，TONGHui—li，LIQing-zhang，GAOXue-iun’(KeyLaboratoryofDairyScienceofMinistryofEducation，NortheastAgriculturalUniversity，Harbin150030，China)Abstract：T

3、issuemassinoculationmethodwasusedinthisstudy，andmammaryepithelialcellsofdiaryCOWweresuccessfullycultivated，mammaryglandepithelialcellswereidentifiedusingcy—tokeratin18immunofluorescencestaining．Thesurvivalrateofceilsinoculation，doublingtimeofcellpopulation，growthcurve，morphologicalandb

4、iologicalcharacterweredetected，andidentifi—cationandestablishmentofnormalcultureddairyCOWmammaryepithelialcelllinesweresetup，cellcouldbepassaged20generationswithagoodbehaviorofproliferation．Throughthecellpas—sageandrepeatedlyfreeze-thaw，dairyCOWmammaryglandepithelialcelllineswereestabl

5、ished，andalargenumberofmammaryepithelialcellswereacquired．Keywords：dairyCOW；mammaryglandepithelialcell；cellline乳腺上皮细胞具有合成和分泌乳汁的功能，是制作乳腺生物反应器的靶细胞，体外培养的能合成和分泌乳蛋白的乳腺上皮细胞具有方便、快捷且真实反映乳腺在体内表达水平的功能[1]。国际上对奶牛乳腺上皮细胞培养的研究较早，其培养方法较复杂，传代次数较少，尚处于初步研究，极少商品化[2-5。。国内对奶牛乳腺上皮细胞的培养也进行了一些探索降引，但体外培养的细胞传代次数

6、有限，没有获得正常的奶牛乳腺上皮细胞系。因此，奶牛乳腺上皮细胞系的建立，将为奶牛乳腺发育学、乳腺病理学、乳腺生物工程学等相关研究奠定良好的基础，对进一步了解泌乳的调控机理以及验证乳腺表达载体具有重要的意义。本研究中成功建立了奶牛乳腺上皮细胞系，获得了大量的乳腺上皮细胞，为进一步在此方面的深入研究提供了理论依据。l材料与方法1．1试验材料乳腺组织来自哈尔滨市成高子屠宰场屠宰的泌乳后期健康的荷斯坦奶牛。收疆日期：2008—03-24基金项目：科技部“863”项目(2006AAl021A4)作者简介：陈建晖(1981一)，男，河南人，硕士生。主要从事基础兽医学研究，E—m

7、ail：chenjianhui一2005@126．COITI*通讯作者：高学军(1969一)，男，黑龙江人，教授，博导，主要从事乳业生物技术研究。Tel：0451—55190244，E-mail：gaoxj5390@sina．c咖万方数据744畜牧兽医学报1．2主要试剂表皮生长因子、胰岛素、牛酪蛋白标准品均购自Sigma公司，优质胎牛血清、DFl2培养基均购自Gibco公司；细胞角蛋白18抗体购自德国Acris公司；其他常规试验药品及试剂均为国产。1．3主要仪器C0：培养箱(日本CO-150型)；DFC280倒置相差显微镜(德国LEICA)；TCSP2AOBS激