奶牛乳腺上皮细胞和奶牛脐带间充质干细胞共培养的试验研究

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1、万方数据万方数据

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3、llJlIllJIlllIIlY2697938本文是国家奶产业体系(CARS-37)“十二五"国家科技支撑项目“牧区及农牧交错带奶牛健康养殖技术集成及产业化示范"(2012BADl2809)；“现代农业(奶牛)产业技术体系建设专项资金资助"(SupportedbyChinaAgricultureResearchSystem)(CARS一37)；“新疆肉牛安全高效饲养关键技术研究与示范"(2011BAD47802)；不同用途马高效、安全养殖共性技术研发(2012BAD45BO1)；新疆肉乳用草食动物营养实验室开放课题资助；自治区重大专项“新疆农区奶牛健康养殖及疫病防控技术推

4、广与示范"(20101230694)的部分研究成果。课题主持人：余雄教授(新疆农业大学动物科学学院)万方数据奶牛乳腺上皮细胞和奶牛脐带间充质干细胞共培养的试验研究摘要为了研究UC．MSCs与BMECs共培养的最适浓度比和最佳作用时间及其作用机制。本试验将P3代UC．MSCs与P3代BMECs按照浓度比例为l：1、1：2、1：3、1：4、1：5、1：10、1：50、1：100、1：1000、2：l等不同比例随机混合培养，同时设立UC．MSCs与BMECs单纯培养组为对照组，并分别于Oh，24h，48h，72h，96h，120h和144h时观察各组细胞的形态变化，用MTT法检测细胞增殖，测定细胞

5、贴壁率，并检测EGF、bFGF、TGF．13、HGF、n盯一Ⅱ、TNF—I瞬IILD的表达水平，同时检测CcOI、HK、LDH并OPK的活性，来探究UC．MSCs与BMECs共培养的作用机制，从而为UC．MSCs在畜牧生产上的研究应用提供新的思路和理论依据。结果显示：体外分离培养的UC—MSCs细胞形态均一、具有成纤维样细胞外观，排列紧密，有一定方向性；通过碱性磷酸酶染色后可见细胞呈深棕红色；能够被诱导为成脂、成骨细胞；将UC—MSCs和BMECs按照不同浓度比混合共培养后，细胞生长状态良好，无抑制作用；MTT检测增殖发现l：2浓度组OD值最高，细胞增殖最快，明显高于单纯UC．MSCs组和单

6、纯BMECs组，各组OD值在72h时均达到最高，随后下降；共培养后细胞贴壁率与时间成正比，其中1：2浓度组细胞贴壁率最高，显著高于单纯BMECs组：UC—MSCs$0BMECs按不同浓度混合共培养后，1：2浓度组培养液上清中的EGF水平显著高于1：1000组、单纯UC．MSCs组及单纯BMECs(P

7、TGF—a币I：ITGF．B分泌水平显著低于0h和144h(P<0．05)：1：1组、l：2组及2：1组bFGF分泌水平显著高于1：50、l：100、1：1000和单纯BMECs组(氏0．05)，且48h、72h的分泌量显著高于0h、24h、144h(氏0．05)：HGF分泌水平在各组之间差异均不显著，但1：2组的分泌量最大，各组HGF分泌量在72h时最高，显著高于Oh、24h、48h(P<0．05)；1：1、1：2、1：3、1：4浓度组HK的活万方数据性显著高于1：1000、BMECs单纯培养组(P

8、O．05)；LD的表达量在1：2浓度组达到最高，1：1、1：2、2：1浓度组显著高于BMECs单纯培养组(JP<0．05)，且在72h时与oh相比差异显著(P

9、、144h组相比均差异显著(尸