丁苯酞对脑缺血再灌注损伤大鼠mmp9活性和血脑屏障通透性的影响

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1、摘要丁苯酞对脑缺血再灌注损伤大鼠MMP．9活性和血脑屏障通透性的影响研究生高兰导师娄季宇张燕柳郑州大学第二临床学院神经内科河南郑州450014平煤集团总医院神经内科河南平顶山467000背景与目的随着我国逐步步入老龄社会，缺血性脑血管病逐渐成为危害人类健康的多发病、常见病。高致病率、高复发率以及高致残率为脑血管病的特点，给社会、家庭和个人带来了沉重的经济和精神负担。因此，探索积极有效的干预治疗措施已成为目前研究的重点。脑动脉闭塞造成脑缺血，使局部脑组织血流下降或中止，导致细胞功能障碍或形态的破坏，立

2、即恢复血流是关键。但是，伴随恢复血流发生的再灌注损伤也不可忽视。所谓的缺血再灌注损伤(isehemiareperfusioninjury)是指缺血的组织器官在一定的时间后，虽然恢复血供，组织损伤，器官功能障碍没有减轻，临床症状甚至有进一步加重的现象。目前研究认为：缺血再灌注损伤病理生理过程中至关重要的是血脑屏障(bloodbrainbarrier,BBB)的完整性。血脑屏障(BBB)是存在于脑组织和血液之间的一个复杂的细胞系统，由中枢神经系统血管内皮细胞、内皮细胞的紧密连接、基底膜以及毛细血管基底膜

3、外的星形胶质细胞终足构成，其能控制血、脑两侧的物质转运，保证中枢神经组织内环境的相对稳定。其中血管基底膜主要由细胞外基质分子(ECM)组成，主要成分包括lv型明胶原、层粘连蛋白和纤粘连蛋白，对维持血脑屏障(BBB)的完整性摘要至关重要。近年来研究认为基质金属蛋白酶(MMPs)，尤其是MMP．9在血脑屏障的开放机制方面具有更重要的意义。给予外源抑制剂抑制MMP一9活性，可减少大鼠脑缺血后的脑梗死体积；脑损伤中，MMP．9的表达过度活跃，可以通过降解神经血管基质，进而损伤血脑屏障(BBB)iJI起脑水肿

4、和出血。MMP-9底物主要为细胞外基质中IV型胶原，又称为IV型胶原酶。因此，寻找以基质金属蛋白酶@MMP．9及其底物血管基底膜IV型胶原(collagenlV)为作用靶点，进而减轻血脑屏障的通透性，减轻脑损伤，发挥神经保护剂作用意义重大。丁苯酞是从芹菜种籽中分离出的有效成分。可分为左旋丁基苯酞(1．NBP)、右旋丁基苯酞(d．NBP))3捎旋丁基苯酞(d1．NBP)，经合成的消旋化合物为黄色油状液体，具芹菜香味。已应用于缺血性脑血管病的治疗，本品可改善卒中发生后的神经功能缺损症状，促进患者功能恢复

5、。但其在治疗局灶性脑缺血再灌注损伤中的分子机制尚未完全阐明。既往研究对脑缺血再灌注损伤的机制多侧重于其对清除氧自由基、抗凋亡和抗炎症反应的作用。但是对局灶脑缺血再灌注损伤中MMP．9活性、基底膜IV胶原及血脑屏障通透性的影响还不清楚。本研究通过参照并改进ZeaLonga线栓法，制备SD大鼠大脑中动脉脑缺血再灌注损伤模型，观察缺血侧大鼠脑组织MMP．9活性、基底膜成分IV型胶原表达、BBB通透性的变化，以及丁苯酞治疗后的效果。进一步探索丁苯酞对脑缺血再灌注损伤神经保护作用机制。材料与方法健康成年雄性S

6、D大鼠90只，体重240"--2809，参照ZeaLonga线栓法，并加以改进制作大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型。将实验大鼠随机分为3组，假手术组30只(sham)，缺血再灌注损伤组30只(MCAO／R)，丁苯酞治疗组30只(NBP)。每组按再灌注时间不同各设3个亚组：6h、12h、24h，每个亚组lO只大鼠。其中5只用于免疫组织化学测定，另外5只大鼠进行血脑屏障通透性的研究。丁苯酞胶囊以0．5％Tween80铝l成10m∥rnl混悬液，治疗组以再灌注后5min用于动物腹腔注射丁苯酞80mg／kg。假

7、手术组不给药，模型组给予相应体积的生理盐水(1ml&g)。在预订时间点处死前30min经舌下静脉注射伊文思蓝(2％EB，2ml／kg)。30min后相应时问点处死大鼠，用免疫组织化学方法测定损伤脑组织中MMP．9蛋白及collagenIV胶原，通过测定损伤脑组织中EB含量来观察BBB通透性的变化。分析采用SPSS17．0统计软件进行统计学处理，所有数据均以均数4-标准羞(Z士s)表示，多组数据比较采用单因素方差分析，任意两组之问的比较采用LSD检验。II摘要P<0．05有统计学差异。结甲二日7尺1M

8、MP-9活性表达：假手术组脑内MMP．9的阳性细胞数在各时间点均比较低；缺血再灌注组MMP．9的阳性细胞数6h可见少量表达，12h持续增加，24h更为显著，各时间点与假手术组比较有显著性差异(P