丁苯酞对大鼠脑缺血再灌注损伤后smac蛋白表达影响的分析与意义

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3、：日期：年月日(本声明的版权归山西医科大学所有，未经许可，任何单位及任何个人不得擅自使用)山西医科大学硕士学位论文月IJ舌脑血管疾病(cerebrovaScukdisease，CVD)是指在脑血管壁病变或血流障碍基础上发生的局限性或弥漫性脑功能障碍，其患病率、复发率、致残率、死亡率都很高，是导致全球人口死亡的三大疾病之一，严重危害人类健康。在我国，脑血管疾病在人口死因中居第二位，给家庭和社会带来沉重负担。其中以缺血性脑血管疾病(ischelniccerebrovasculardisease，ICVD)发病率最高，

4、约占全部脑卒中的80％I¨。现代医学研究认为脑缺血再灌注损伤是大多数缺血性脑血管疾病的主要病理生理过程【川。脑缺血再灌注损伤(cerebralischemiareper血sionmjury，CI对)是指缺血受损的脑组织区的血流超过再灌注再通时间窗(6h)下，再通血流对脑组织损伤继续加剧的病理生理现象。其发生机制主要有自由基学说、钙超载学说、线粒体功能障碍、迟发性神经元死亡学说等IjJ。研究发现，缺血性脑损伤引起的神经元凋亡主要是由线粒体途径介导的，在凋亡诱导因素作用下，线粒体可释放出多种因子，包括抗凋亡因子和促凋

5、亡因子，现在大家公认的线粒体释放的促凋亡因子有2种：①细胞色素C②Smac蛋白，SrIlac蛋白通过与凋亡抑制蛋白IAPs(inhibitofapoptosisproteiIls)结合来激活半胱氨酸蛋白酶caSpaSes家族达到促凋亡作用。细胞受到凋亡刺激信号后，线粒体不仅释放Cyt．c、AIF(Apoptosis．InduciIlgFactor)诱导激活caLspaSes，同时还释放Smac蛋白来拮抗IAP，从而激活causpaSes，诱导细胞凋亡，Smac蛋白的发现是对线粒体为调控细胞凋亡中心新理论的完善和补

6、充L斗J，因此阐明大鼠局灶性脑缺血再灌注后Smac蛋白表达特征，对于深入探讨脑缺血再灌注的病理机制及早期有效干预意义重大。丁苯酞(消旋．3．正丁基苯酞)，商品名为恩必普，与芹菜籽中提取的左旋芹菜甲素的结构相同，是我国脑血管领域第一个拥有自主知识产权的脑保护药。现代药理研究表明，NBP可作用于脑缺血再灌注后损伤的多个环节，增加缺血区脑血流和改善脑缺血区微循环，缩小局灶性脑缺血后的梗死灶，减轻神经功能损伤的程度，对缺血性卒中具有肯定的治疗作用，其中，NBP可抑制大鼠皮层神经元凋亡作用已在动物实验和细胞培养过程中得到证

7、实，但其抗凋亡的具体机制目前尚未明确。本实验采用大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型，探讨促凋亡蛋白Smac在不同时间点的表达变化及丁苯酞对其的影响，并探讨其可能的作用机制，为丁苯酞对脑缺血再灌注损伤后的保护作用提供摹础实验依据。山西医科大学硕十学位论文1．材料1．1动物健康雄性wistar大鼠180只，1．2试剂Smac兔抗大鼠多克隆抗体TUNEL原位检测试剂盒DAB显色试剂盒多聚甲醛丁苯酞胶囊1．3主要试剂配制方法材料与方法体重200一2509，由山西医科大学生理实验室提供。北京中杉金桥生物技术有限公司天津傲然精细

8、化工研究所，批号：20070508石药集团恩必普药业有限公司，批号：08100111(1)4％多聚甲醛固定液的配制：O．1MPBS1000lIll中加入多聚甲醛409，加热至透明，冷却后过滤，滴加1n10l／L的NaOH调节至pH值为7．2～7．4，4℃保存备用。(2)0．1MPBS配制(pH7．2～7．4)：NaCl，8．09；KCl，0．249；Na2HP04．12H