福建省梨种质资源issr分析

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1、福建农林大学硕士学位论文福建省梨种质资源的ISSR分析摘要梨属于蔷薇科(Rosaceae)，梨亚科(Maloideae)，梨属(PyrusL．)。我国梨已经有3000多年的栽培历史，梨属植物在全世界大约有30多个种，其中就有13个种起源于中国，为了了解我国原产梨属植物种在整个梨属中的位置及杂种梨的起源，有必要借助最新的分子生物学方法，对我国原产梨属植物的系统关系以及我国梨品种的起源做深入研究。ISSR分子标记技术是近十几年来发展起来的一种新的分子生物学技术，目前己广泛应用于农作物等相关领域的研究。本研究借助ISSR分子标记技术对梨56个栽培品种进行了DNA水

2、平上的研究，旨在建立一套操作简便、快速、高质量的梨DNA提取和纯化技术，并建立一个适合梨的ISSR技术体系以及对所研究品种进行聚类分析、亲缘关系、遗传多样性分析，为今后梨树遗传多样性及品种鉴定提供了理论依据。主要结果如下：1针对梨成熟叶片富含单宁、多糖、色素及酚类等次生物质，采用热硼酸法提取DNA，含量高，无蛋白质、RNA或多酚类等干扰物质，不论从数量还是纯度上均可满足ISSR分析的要求，建立了适宜梨DNA提取的方法。2通过系统的比较研究，建立了稳定的梨ISSR-PCR分析的反应体系。反应体系为：20斗l体系中含模板DNA30ng，引物浓度为0．4gM，dN

3、TPs浓度为0．20mM，Taq酶的用量为lU，10×Buffer2gL。扩增程序为：94℃预变性5min，94℃变性lmin，52℃退火1min，72℃延伸2min，40个循环；72℃延伸8min，4"C下保存。该体系扩增出的条带清晰，效果良好，能够满足ISSR分析。．3从96条引物中筛选出11条ISSR引物，对56份梨材料进行了ISSR分析，共扩增出127条ISSR谱带，平均每条引物扩增出11．5条谱带。11条引物共扩增出多态性位点113条，平均每个引物扩增位点10条，多态性位点百分率为87．3％。4依据ISSR分析结果，对供试的56个梨品种进行聚类分析

4、，结果表明，它们之间的遗传相似系数在0．513"-0．868之间，平均值为0．667，这56个品种分为6组，之间相似系数／>0．571，揭示了福建省56个梨品种资源之间的亲缘关系，为今后梨树遗传多样性及品种鉴定提供了重要的理论依据。关键词：梨；种质资源；ISSR福建农林大学硕士学位论文福建省梨种质资源的ISSR分析StudyonGermplasmResourcesofPearintheFujianProvincebyISSRTechniqueAbstractPearbelongstoRosaceae，Maloideae，助USL．TheChinesepear

5、havebeencultivatedmorethan3，000yearsofhistory,thepearspeciesintheworldthereareabout30species，Thereare13kindsofwhichoriginatedinChina．InordertounderstandtheoriginofourspeciesofpeargenusPyrusinthewholeofthelocationandtheoriginofhybridpear．It’Snecessarytousethelatestmethodsofmolecular

6、biology，therelationshipbetweenplantspeciesandtheoriginofChina'spear-depthstudydone．ISSRmolecularmarkertechniquesdevelopedanewmolecularbiologytechnologyoverthepasttenyears，hasbeenwidelyusedinmammalsandhighercrop-relatedresearchinthefield．Withthisstudy，ISSRmolecularmarkersfor56pearcu

7、ltivarsthelevelofaDNAstudyaimedatestablishingasimple，rapid，high-qualitypearextractandpurifyDNAtechnology，AndtheestablishmentofanappropriatetechnicalsystemISSRpear，aswellasresearchonthespeciesclusteranalysis，geneticrelationship，geneticdiversityanalysis，Haveprovidedthedeepermoreimpor

8、tanttheorybasisforthenextp