葡萄种质资源遗传多样性的issr分析

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1、新疆大学硕士研究生学位论文硕士研究生学位论文新疆大学论文题目(中文）：葡萄种质资源遗传多样性的ISSR分析论文题目(英文）：AnalysisofgeneticdiversityofVitisgermplasmresourcesbyISSRmarkers研究生姓名：张娜学科、专业：生物学研究方向：植物学导师姓名职称：李群副教授论文答辩日期2015年5月21日学位授予日期年月日新疆大学硕士研究生学位论文ThesisforMaster'sDegreeAnalysisofgeneticdiversityofVitisgermplasm

2、resourcesbyISSRmarkersMajor:BiologyOrientation:PlantMolecularBiologyCandidate:ZhangNaSupervisor:AssociateProf.LiQunCollegeofLifeScienceandTechnology,XinjiangUniversity2015.5I新疆大学硕士研究生学位论文摘要葡萄是国内外广泛栽培的重要果树之一，其种质资源和变异类型极为丰富。在长期的自然选择、人工培育过程中，葡萄品种的遗传背景变得较为复杂。为培育优良的葡萄新品种

3、，有必要对葡萄品种的遗传多样性和遗传背景进行分析。本文以来自新疆葡萄瓜果研究开发中心葡萄种质资源圃的137份葡萄种质资源为材料，采用ISSR分子标记技术对其遗传多样性进行分析。旨在利用一种高效的分子标记技术，对生产中常见的葡萄种质资源进行分类鉴定，以及对生产中产生的同名异物或同物异名品种进行鉴别，为葡萄杂交育种和产业健康、持续发展提供依据。主要研究结果如下：1．对CTAB提取缓冲液的配方进行了改良，将CTAB浓度提升至3%，PVP40浓度提升至4%，β-巯基乙醇浓度提升至2%，其他成分不变。结果表明，采用经改良的CTAB缓冲液

4、提取获得的葡萄叶片总DNA质量和纯度较高，可满足ISSR分析要求。与传统的提取方法相比，该提取方法能有效地降低提取过程中葡萄叶片酚类化合物、多糖等物质对DNA的污染。2．经单因素实验结合正交设计实验，优化了葡萄基因组ISSR-PCR反应体系中的各影响因子，最终确定最佳PCR反应体系为：dNTPs浓度0.225mmol/L，Taq2+酶用量1.0U，引物浓度1.0μmol/L，Mg浓度2.75mmol/L，DNA模板用量30ng，反应体系为20μL；最佳反应程序和反应条件为：94℃预变性3min，94℃变性30s，Tm退火50s

5、，72℃延伸90s，循环40次，72℃延伸10min。利用该体系能够扩增获得清晰、稳定的条带，可以用于葡萄种质资源遗传多样性的ISSR分析。3.从50条ISSR随机引物中筛选出17条扩增产物带型清晰，多态性较高的引物，对137份葡萄种质资源进行了ISSR-PCR扩增，经统计，共获得166个扩增条带，其中多态性条带有109个，多态性比率达到65.66%，平均每一个ISSR引物扩增出9.76个谱带，其中具有多态性的扩增谱带为6.41个。4.聚类结果表明：137个葡萄品种的遗传相似系数在0.22~1.00之间，在遗传相似系数为0.6

6、0处可将供试的137个葡萄品种划分为四个类群：第一个类群包括127个欧亚种，5个欧美杂交种；第二个类群共包含4个欧美杂交种；第三I新疆大学硕士研究生学位论文个类群只有一个欧亚种；第四个类群也只有一个美洲种。本研究的大部分聚类分析结果与传统系谱一致，即欧亚种、欧美杂交种和美洲种大部分都各自聚为一类，但是部分聚类结果与传统系谱也有差别。其中，弗列奥、意斯林、蛇龙珠、登瓦斯玫瑰等抗性较强的葡萄品种聚在一起，可以作为抗性育种的材料；马奶子、白拉查基、无核白鸡心等丰产性较好的葡萄品种聚在一起，可以作为丰产葡萄的育种材料。5.研究结果验证

7、了新疆本地葡萄品种由欧亚种演变而来。新疆本地葡萄品种与欧亚种葡萄聚在第一个类群中，说明新疆本地葡萄品种并非野生种，由欧亚种逐渐演变而来。本研究供试的葡萄材料间的遗传多态性有明显差异，为新疆地区葡萄种植资源的种质鉴定、保存和利用等提供参考依据。关键词：葡萄；ISSR；遗传多样性；聚类分析II新疆大学硕士研究生学位论文AbstractGrapeisoneofthemostimportanteconomiccropscultivatedwidelyintheworld,germplasmresourcesandvariationty

8、peisextremelyrich.Inthelong-termprocessofnaturalselectionandartificialcultivation,thegeneticbackgroundofthegrapevarietybecomecomplicated.T