安徽省黄精种质资源遗传多样性的issr分析

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1、分类号:Q341密级:学号:S10090706262主艹学位论文安徽省黄精种质资源遗传多样性的ISSR分析GeneticE)iversityofAnhuigermplasmresourcesofPJJygJ刀″Ⅱ〃byISSR研究生:张红梅指导教师:项艳教授~申请学位门类级别:__ˉ农学硕士专业名称:园林植物与观赏园艺研究方向:园林植物遗传育种所在学院:林学与园林学院答辩委员会主席:彡钅饣2013垄F6月摘要本文利用ISSR技术对安徽省黄精属植物进行了遗传多样性分析。主要包括以下品种：黄精(Polygonatum

2、sibiricum)、多花黄精(PolygonatumcyrtonemaHua)、长梗黄精(PolygonatumfilipesMerr)、湖北黄精(PolygonatumzanlanscianensePamp.)、玉竹(Polygonatumodoratum(Mill.)Druce)。通过ISSR分子标记方法，从DNA水平对安徽省黄精属不同地区的14种植物进行遗传多样性分析，并根据特异性条带利用UPGMA方法构建聚类树状图进行聚类分析，获得以下主要结果：1、以多花黄精作为研究对象，选用改进的CTAB法提取黄精叶

3、片的基因组DNA，琼脂糖凝胶电泳检测和OD值检测表明：提取的DNA条带均在23kb左右，OD260/OD280均在1.6-2.0之间，符合分子生物学实验的要求，确定了适合的黄精属植物基因组DNA提纯的方法。2、采用5因素4水平的正交实验，通过对影响PCR反应的TaqDNA聚合酶、2+buffer(Mg)、模板DNA、dNTP和引物等因素的筛选，建立了黄精属植物最适的ISSR-PCR反应体系，即25µl的反应体系中含有1.0UTaqDNA聚合酶，3.5mmol/L2+buffer(Mg)，80ng模板DNA，0.0

4、8mmol/LdNTP和0.16µmol/L引物。3、在100条UBC引物(UBC801~UBC899)中初选出60条适合黄精植物基因组PCR扩增的引物，利用上述体系通过梯度PCR反应确定了各引物的最适退火温度，最终筛选出10条效果最优的ISSR引物。4、利用确定的10条效果最优的ISSR引物对提取的14种黄精属植物的DNA进行PCR扩增，共扩增出115条重复性高的、清晰的条带，其中多态性的条带为114条，多态性百分率为99%。每个引物扩增出的条带平均为10~13条，其中条带重现率为92%。扩增条带的大小主要集中

5、在200~3000bp。5、利用NTSYS-pc2.10e聚类分析软件对14个黄精属植物的Jaccard遗传相似系数进行了计算，并利用UPGMA方法构建了聚类树状图。在14个黄精属植物中，亲缘关系最近的为采自九华山和黄山的玉竹，遗传相似系数为0.6870，遗传距离为0.3754，说明了不同地域的分布并没有让其产生教大的遗传变异。亲缘关系最远的为采自九华山、黄山的长梗黄精和采自合肥林科院的黄精，遗传相似系数为0.4261，遗传距离为0.8531，说明了它们之间遗传变异程度较大。6、利用POPGENEversion1

6、.32软件对四个亚类进行居群遗传多样性和居群遗传结构的分析，得出本实验测定的各遗传参数为：有效等位基因数Ne为1.5888，期望杂合度H为0.3489，Shannon信息指数I为0.5229，多态性条带百分率PPB为99.13%。黄精四个亚类种水平的基因多样性Ht=0.3500,居群内基因多样性Hs=0.1985,居群间基因分化系数Gst=0.4328,基因流为Nm=0.6553。关键词：黄精属ISSR正交设计遗传多样性IAbstractAnhuiPolygonatumplantsinthisarticlewer

7、eanalyzedusingISSR.ThespeciesmainlyincludesPolygonatumsibiricum,PolygonatumcyrtonemaHua,PolygonatumfilipesMerr,PolygonatumzanlanscianensePampandPolygonatunodoratum(Mill.)Druce.ByusingISSRmolecularmarkermethod,theresearchershaveanalysedthegeneticdiversityof14k

8、indsofPolygonatumwhichselectedin14differentplacesofAnhui.AndthisresearchisfromtheDNAlevel.Atthesametime,byusingtheUPGMAmethod,theresearchershaveconstructedaclustertreemaptododendrogramclu