人il8基因在卵巢上皮性癌浸润转移中作用机制的研究

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1、英文缩写IL一8MMPVEGFPBMCMTTLPART．PCRPBSFCMCXCRPIELISAbFGFTNFD晒TGFMVDG418DMSOInterleukin．8MatrixMetalloProteinasesvascularendothelialgrowthfactorPeripheralBloodMononuclearCellMethylThiazolylTetrazoliuLysophosphatidicAcidreversetranscription-polymersechainreactionphosp

2、hatebufferedsalineflowcytometrychemoattractantcytokinereceptorProliferationindexEnzymelinkedImmunosorbentbasicfibroblastgrowthfactortumornecrosisfactorInterferontumorgrowthfactormicrovesseldensitygeneticindimethylsulphoxide白细胞介素8基质金属蛋白酶血管内皮(细胞)生长因子外周血单个核细胞四甲基偶氮唑

3、蓝溶血磷脂酸逆转录聚合酶链式反应磷酸盐缓冲液流式细胞仪趋化因子受体增殖指数酶联免疫吸附试验基本的成纤维细胞生长因子肿瘤坏死因子干扰素肿瘤生长因子微血管密度氨基糖苷抗生素二甲基亚砜12河北医科大学学位论文使用授权及知识产权归属承诺本学位论文在导师(或指导小组)的指导下，由本人独立完成。本学位论文研究所获的研究成果，其知识产权归河北医科大学所有。河北医科大学有权对本学位论文进行交流、公开和使用。凡发表与学位论文主要内容相关的论文，第一署名单位为河北医科大学，试验材料、原始数据、申报的专利等知识产权均归河北医科大学所有。否则

4、，承担相应的法律责任。—+。研究生一师躲獭学院领导虢c炒g年年月17nIzlC歹叮≮平T月一，研究生学位论文独创性声明本论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果，除了文中特别加以标注和致谢等内容外，文中不包含其他人已经发表或撰写的研究成果，指导教师对此进行了审定。本论文由本人独立撰写，文责自负。上j．研究生两嵯导师妊粥x三≥∞乎年4月2．(}日中文摘要人IL．8基因在卵巢上皮性癌浸润转移中作用机制的研究摘要目的：卵巢癌是威胁妇女健康常见的妇科肿瘤，因其早期发现较难，肿瘤病理类型多，组织结构复杂并各具不同的生物学

5、特性，一直是妇科肿瘤领域研究的难点。卵巢上皮性癌其恶性程度比性索间质性肿瘤高，治疗效果也远不如恶性生殖细胞肿瘤，病程发展迅速，而且以盆腹腔种植和直接浸润蔓延为主要特征，不易早期诊断，死亡率极高，是卵巢癌中最有待研究的一种肿瘤，因此一种全新的治疗方法亟待需要探讨。基因的异常表达及其与卵巢肿瘤的发生发展关系的研究己成为分子生物学研究的热点。卵巢癌的发生和发展是一个复杂、多步骤的过程，与许多基因和蛋白的表达密切相关。白细胞介素8(interleukin8，IL．8)，是Yoshimur于1987年发现的第一个趋化性细胞因子，

6、属于CXC家族，在炎症和免疫过程中起重要的调节作用。近年来IL．8作为恶性肿瘤相关因子越来越多地引起了国内外学者的关注。目前已知多种肿瘤细胞均可分泌IL．8，实体肿瘤组织IL．8过度表达与肿瘤生长侵袭转移密切相关，而其促进肿瘤发生发展的机制尚不完全清楚。DNA重组技术的建立与发展在理论和实践上为卵巢癌治疗提供了新的策略——基因治疗有望成为卵巢癌治疗的新途径。理想的治疗基因应有效的抑制肿瘤细胞生长，而对正常组织、细胞无明显抑制作用。本研究将人IL．8基因克隆到真核表达载体pcDNA3．1(+)中，在脂质体作用下瞬时an／

7、或稳定转染低表达IL．8基因的上皮性卵巢癌细胞株OVCAR．3中，探讨了其对卵巢癌细胞生长增殖及侵袭转移能力的作用机制，将培养好的各实验组卵巢癌OVCAR-3细胞悬液直接接种于裸鼠背部皮下组织内，观察了裸鼠生长状况和／或出瘤时间及IL一8cDNA对裸鼠皮下移植瘤生长及卵巢癌肺转移的影响，为IL一8基因在上皮性卵巢癌发生发展与治疗及判断预后作用机制的深入研究奠定了实验及理论基础。方法：1构建IL一8基因真核表达载体中文摘要提取健康志愿者外周血单个核细胞(PBMC)的总RNA，通过RT-PCR扩增IL．8编码序列基因片段，

8、并将其克隆至PMD．18T载体构成PMD．18T／IL．8，BamHI和XhoI双酶切后，与经相同双酶切后的真核pCDNA3．1(+)表达载体连接，构建成pcDNA3．1(+1)／IL．8重组质粒。2瞬时和／或稳定转染人卵巢癌细胞OVCAR．3以脂质体介导法将pcDNA3．I(+)／IL．8重组质粒转染低表达该目的基因的OVCAR