奥美拉唑逆转人肺腺癌耐顺铂细胞株a5492fddp耐药性研究

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2、20附表⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯OOOO00⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯OoOooOO00⋯一·29讨论································⋯···················一··一·““一·一””一”31结论⋯······································一⋯”·”一““”．．“一一“”一””·37参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯38综述V-ATPase与肿瘤的关系及研究进展⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯42致谢·”⋯一一””一””一”“⋯一““一”“一“一一““一””一””⋯⋯一“”一“⋯52

3、个人简历⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯53＼．l，；。rj__·1．．●■●■■‘．—一中文摘要奥美拉唑逆转人肺腺癌耐顺铂细胞株A549／DDP耐药性研究摘要目的：本实验研究V-ATPase非特异性抑制剂一奥美拉唑逆转人肺腺癌耐药株A549／DDP细胞耐药性作用及可能机制。方法：选用人肺腺癌耐药株A549／DDP为研究对象，采用MTT法测定顺铂(DDP)对A549及A549／DDP细胞的半数抑制浓度(IC50)，以此判断A549／DDP细胞的耐药性情况。采用MTT法确定奥美拉唑(Omerprazole，简称OME)非细胞毒性剂量：取低于10％

4、抑制浓度(inhibitingconcentration，IClo)作为药物作用浓度：OME499／ml。在此浓度逆转剂作用下测定顺铂对A549／DDP细胞的半数抑制浓度(IC50)，以此判断OME对耐药细胞药物敏感性的影响。光学显微镜观察细胞形态学改变。运用流式细胞仪(Flowcytometry，FCM)测定加入逆转剂后对A549／DDP细胞株的细胞周期影响。运用流式细胞仪检测有无逆转剂作用下A549／DDP细胞中Bcl．2和PTEN蛋白表达的情况。应用激光扫描共聚焦显微镜(LaserScanningConfocalMicroscopy，LSCM)检测OME处理

5、前后细胞内BCECF．AM(pH探针)荧光强度的变化，间接反映细胞内pH之变化。采用半定量逆转录聚合酶链反应(ReverseTranscriptionPolymemseChainReaction，RT-PCR)检测V-ATPasemRNA在人肺腺癌细胞株A549细胞和耐顺铂细胞株A549／DDP中表达情况。采用半定量逆转录聚合酶链反应检测有无逆转剂作用下A549／DDP细胞中Bcl．2mRNA和PTENmRNA表达的情况。结果：MTr法测定DDP对A549细胞的IC50为1．9rtg／ml，DDP对A549／DDP细胞的IC50为43．499／ml。OME对A54

6、9／DDP细胞的IClo为8．7pg／ml。选取非细胞毒作用浓度为4I_tg／ml的OME为逆转剂，在经逆转剂预处理24h情况下，DDP对A549／DDP细胞的IC50由43．41xg／ml降至30．1肛∥ml，逆转倍数约为1．44，与无逆转剂组相比具有显著性差异(P

7、，G1期细胞明显增多，S期细胞则相对减少，与无逆转剂组相比具有显著性差异(P

8、99，二者