孕酮对大龄大鼠大脑中动脉完全闭塞后caspase3表达影响与其意义

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1、学位论文原创性声明本论文是我个人在导师指导下进行的工作研究及取得的研究成果。论文中除了特别加以标注和致谢的地方外，不包含其他人或其它机构已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出贡献的个人和集体，均已在论文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律责任由本人承担。作者签名：日期：年月日学位论文使用授权声明本人授权汕头大学保存本学位论文的电子和纸质文档，允许论文被查阅和借阅；学校可将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其它复制手段保存和汇编论文；学校可以向国家有关部门或机构送交论文并授权其保存、借阅或上网公布本学

2、位论文的全部或部分内容。对于保密的论文，按照保密的有关规定和程序处理。作者签名：导师签名：日期：年月日日期：年月日汕头大学医学院硕士学位论文中文摘要背景与目的：女性在绝经前心脑血管疾病发病率明显较男性少，但是在绝经之后发病率和男性类似，随后的流行病学研究发现性激素在其中起到非常重要的作用，由此开启了相关研究，但由于在后续的相关临床及基础研究中发现雌激素有血栓形成、诱发乳腺癌等一些副作用，目前有关性激素对脑血管病的保护作用的机制及临床应用研究主要集中于孕酮。孕酮作为在神经系统中能够合成的神经活性甾体，已有研究表明孕酮能够明显改变各种脑损伤的预后。孕酮

3、在各种脑损伤后的神经保护作用日益受到关注，流行病学调查、动物基础实验以及临床研究显示:孕酮可减轻脑损伤后出现的脑水肿，减小脑梗死体积，减轻实验性脑缺血损伤后神经功能;孕酮对脑血管疾病的保护机制主要为减轻脂质过氧化反应、减少自由基生成、稳定细胞膜结构、保护血脑屏障;孕酮还具有调节一氧化氮生成、抗神经兴奋性毒性、抗细胞调亡、调节炎症反应和神经营养等作用。细胞凋亡过程分为启动、效应、消退三个阶段，其中效应气是核心阶段，而caspase-3为效应期关键因子，决定细胞凋亡的进行，被称为细胞死亡因子。活化后的caspase-3切割蛋白质底物、参与调节细胞骨架、

4、抑制抗凋亡蛋白bcl-2等，最终引起细胞凋亡但是以上都使用适龄动物脑梗塞模型，而现实中急性缺血性脑卒中人群主要为老年人（>65岁），根据以上特点，本实验通过制作老龄(饲养>15月)SD大鼠右侧中动脉完全阻断模型模拟老年人大面积急性缺血性脑卒中和使用免疫组织化学技术研究Capase-3的表达情况，从而探讨孕酮对大龄大鼠大脑中动脉完全闭塞后caspase-3表达影响及其意义。内容与方法：选用雄性SD大鼠40只，鼠龄为15月,随机分为三组：⑴假手术组（Sham组n=8）；⑵完全脑缺血组(I/R组n=16)；（3）孕酮治疗+完全性急性缺血性脑卒中组（I/R

5、+PROG组n=16），治疗组孕酮分别以手术前半小时、术后每隔12小时腹腔注射一次；三组再根据急性脑卒中后时间的不同分为6h、12h、24h48h四组，每组2-3只。手术组为采用线栓法制作急性完全性局灶性脑卒中损伤模型，假手术组（sham）操作与手术组相同，只是不进行插线。6h、12h、24h、48h后经4%多聚甲醛灌注、断头取脑，在视交叉前后各1mmI汕头大学医学院硕士学位论文处作冠状切面，置于4%多聚甲醛中固定24h，流水冲洗12h，经脱水、透明、石蜡包埋，切片厚4μm，经过HE染色了解神经元破坏情况判断模型制作是否成功；使用免疫组织化学染色和

6、图像分析系统检测大鼠海马CA1区和顶叶皮质区Caspase-3表达情况。结果：⑴神经功能评分：I/R组及PROG+I/R组大鼠麻醉清醒后均出现明显的左侧眼球下陷，左侧前肢无力，向右侧转圈，或向右侧倾倒，神经功能评分为2～4，平均为2.65+0．5分；PROG+I/R组神经功能评分为2-4分，平均为2.45+0.35分；假手术组（sham组）无神经功能损害表现。神经功能损害在24h是最明显；单纯手术组和孕酮+手术组的神经功能评分无明显差别。⑵HE染色：Sham组：海马CA1区神经细胞形态正常，结构完整，排列紧密，边界清，胞浆淡染，胞核呈蓝色，胞核轮廓

7、清楚，核大呈圆形或椭圆形（图片1，图片3）。I/R及PROG+I/R组：缺血侧（右侧大脑中动脉供血区）海马CA1区神经细胞排列紊乱，胞浆浓缩，甚至有胞浆空泡形成，核固缩浓染，间质稀疏，正常神经细胞数量模型减少（图片2，图片4）。（3）半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶（Caspase-3）免疫组织化学染色的切片在光镜下观察。Sham组海马CA1区和顶叶皮质区Caspase-3可见表达，神经元细胞其阳性表现部位在胞质中，锥体神经阳性表现部位在胞膜上，I/R及PROG+I/R组海马CA1区和顶叶皮质区Caspase-3表达较Sham组增多，三组组间比较有显著差异。

8、（P＜0.05）。I/R和PROG+IR组间不同缺血后时间点Caspase-3表达情况具有差异性（P＜0.05），其中6小