不同低温对鼠永久性大脑中动脉闭塞后nf-кb表达及脑梗死体积的影响

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1、三峡大学学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果，除文中已经注明引用的内容外，本论文不含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体均已在文中以明确方式标明，本人完全意识到本声明的法律后果由本人承担。学位论文作者签名：I日期：引言脑血管疾病是危害人类健康，威胁人类生命的一种常见病、多发病，具有高发病率、高致残率及高死亡率等特点,给社会和家庭带来严重的经济和精神负担。其中，急性缺血性脑血管病占所有脑血管病的55%～70%。因此，对其进行积极有效的防治一直是医学界最关注的问题之一。大脑中动脉（m

2、iddlecerebralartery,MCA）是临床缺血性脑血管病的好发部位，临床上患者脑缺血后由于各种原因接受溶栓治疗的比例很低[1]，故本实验选择永久大脑中动脉闭塞（middlecerebralarteryocclusion,MCAO）模型。传统认为脑既无淋巴组织，又无免疫反应，是个免疫特免区（immunologicalprivilegearea）。到1948年，Medawar等人研究发现，中枢神经系统亦具有免疫功能，能够发生免疫反应。免疫反应一方面能够清除有害物质、修复受损组织，另一方面则导致局部的和广泛性的脑组织损伤及全身性损害。在中枢神经系统损伤时，常因损伤范围不同，出现各种类型的

3、吞噬细胞，包括星型胶质细胞、小胶质细胞、少突胶质细胞、单核细胞和中性粒细胞。这些细胞一方面具有吞噬作用，另一方面能够释放NO、细胞因子等，导致继发性脑损害。NF-κB（nuclearfactor-κB）因参与了B细胞κ轻链的表达调控而得名。其在免疫反应，炎症，细胞生长，分化，凋亡，癌变和个体发育等方面发挥多种重要的生物学功能。近年来随着研究的不断深入，NF-κB在脑缺血后的病理生理过程中的重要作用逐渐被人们所认识。许多研究表明，缺血时神经细胞、脑血管内皮细胞和胶质细胞中的NF-κB活化。NF-κB的活化可促使黏附分子、急性期蛋白、细胞表面受体和细胞因子表达，导致续发性脑损害[2]。因此，NF-

4、κB被视为预防脑缺血过程中细胞损伤的一个重要靶点而被广泛研究。目前国际上将低温划分为轻度低温（mildhypothermia）33-35℃、中度低温（moderatehypothermia）28-32℃、深度低温（profoundhypothermia）17-27℃和超深低温（ultra-profoundhypothermia）2-16℃。深低温治疗早在20世纪50年代已应用于临床，以保护心、脑等重要脏器。然而，由于传统的深低温治疗会导致心率失常、低血压及凝血功能障碍等严重并发症，限制了它在临床的广泛应用。1987年，Busto[3]采用不同的温度对实验性大鼠脑缺血进行干预，发现轻度降低大鼠的

5、体温（32-34℃）即可明显减少缺血所致的神经细胞死亡，效果等同于深低温却无深低温的并发症。低温脑保护的机制仍未完全阐明，现已提出的有抑制代谢率、抑制兴奋性氨基酸的释放、抑制毒性神经介质的释放、细胞修复蛋白的再合成、减少内源性氧自由基的产生、脑血流量和血脑屏障的保护、遗传信息的改变等等[13-6]。而近年来研究表明，低温脑保护还有更复杂的机制。那么，在永久脑缺血后不同时间段实施低温干预是否能取得脑保护效果？不同的温度之间是否存在差异？这其中是否涉及到NF-κB的表达？目前研究尚少。本研究拟通过以下两个部分初步探讨低温脑保护的可能机制，为临床实施低温治疗的时间窗及最适温度提供可靠的实验依据。

6、第一部分：通过改良的Longa线栓法[7]制备大鼠MCAO永久缺血模型，分别在缺血2h、4h、6h和12h后给予不同的温度处理，观察低温对脑梗死体积和组织形态学损伤的影响，明确在本研究条件下，低温的脑保护作用。第二部分：观察低温干预后，对应时间点NF-κB蛋白表达，探讨低温脑保护的可能机制，以期为临床实施低温提供必要的理论依据。21不同低温对鼠永久性大脑中动脉阻塞后脑梗死体积的影响1.1实验材料1.1.1实验动物选用雄性SD大鼠120只，体重为190－220g，购于华中科技大学同济医学院实验动物中心，动物批号：SCXK（鄂）：20040007。1.1.2主要试剂1）TTC（天津市科密欧化学试剂

7、开发中心，批号200500319）。2）戊巴比妥钠(国药集团化学试剂有限公司，批号：20041117)。3）0.01MPBS（PH值7.2-7.4，配法：1000ml双蒸水中加入氯化钠9克、Na2HPO4・12H2O4克和NaH2PO4・2H2O0.4克）。1.1.3实验仪器1）LeicaTP1020自动脱水机2）Leica1125EG1150H包埋机3）MICROMHM340E切片机4）Leic