trail2c111281蛋白自剪切功能原核表达载体的构建、表达及其生物学活性的初步的研究

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1、l川文学碛士学位论文作者扬文理导师草扬袭艘AmpbpCCBDeDNADcRDRDTTEBampicillinbasepaircys，cystelne缩略词表chitinbindingdomain氨苄青霉素碱基对半胱氨酸几丁质结合域completementarydeoxynucleicacid互补DNAdecoyreceptordeathreceptordithiothreitolethidiumbromideE．coliEscherichiacoliEDTAEST5一FuhrIPTGkDaLB诱骗受体死亡受体二硫苏糖醇溴化乙锭大肠埃希菌

2、ethylenediaminetetraaceticacid乙二胺四乙酸expressedSequencetag表达序列标签5一Flurouracilhour5一氟尿嘧啶小时isopropyl—B—D-Galactopyranoside异丙基硫代一B一硫代半乳糖kilodaltonLuria-Bertanimedium千道尔顿Luria—Bertani培养基口川土学J重士学位论文作者杨文理导师覃扬教授MCSmlnmlM0．D．PAGEPCRPMSFPBSrpmSDSSRBTEMEDTNFTRAILTriSIIgp1multipleclo

3、ningsitemlnutemillilitermol／1iteropticaldensity多克隆位点分钟毫升摩尔每升光密度值polyacrylamidegelelectrophoresis聚丙烯酰胺凝胶电泳polymerasechainreaction聚合酶链式反应phenylmethylsulfunylfluride苯甲基磺酰氟phosphatebufferedsaline磷酸盐缓冲液rotateperminute转／分钟sodiumdodecylsubphate十二烷基磺酸钠sulforhodamineB磺酰罗丹明BN，N，N’

4、，N’一tetramethylethyleneN，N，N’，N’一四甲基7,--胺diaminetumornecrosiSfactor肿瘤坏死因子TNF—relatedapoptosis—inducing肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配1igand体trishydroxymethylaminomethane三羟甲基氨基甲烷mlcrogrammicroliter2微克微升_川土学硕士学位论文作者杨文理导师覃扬教授声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不

5、包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得四川I大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献，均己在论文中作了明确的说明并表示谢意。本学位论文成果是本人在四川I大学读书期间在导师指导下取得的，论文成果归四川大学所有，特此声明。申请人签名：褐支移导师签名：-川土学硕士学位论文作者杨文理导师草扬教授中文摘要IRAIL’¨啦，蛋白自剪切功能原核表达载体的构建、表达及其生物学活性的初步研究研究生杨文理导师覃扬教授【背景与目的】恶性肿瘤患病人数呈逐年上升趋势，危害人类生命健康，正逐渐超过心脑血管

6、疾病而成为人类的头号杀手。近几年肿瘤的凋亡疗法被认为是一种极具潜力的抗肿瘤治疗策略。肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体(TNF—relatedapoptosis—inducingligand。TRAIL)是TNF超家族新成员，是一种凋亡分子，又叫Ap02L，其基因的染色体定位是3q26，其cDNA全长是1042bpnl；TRAIL蛋白属II型跨膜蛋白，N端位于胞膜内侧，为疏水端，无信号肽序列；C端位于胞膜外侧，为亲水端。全长281个氨基酸残基，其中241个位于胞膜外区，功能部位为114—281位氨基酸残基。1。其分子量为32．5kDa，等电

7、点为7．63。TRAIL的五种特异性受体：一类是死亡受体TRAIL—R1(DR4)和TRAIL—R2(DR5)，广泛表达于多种正常细胞和肿瘤细胞，TRAIL与DR4或DR5结合可以诱导细胞凋亡；另一类是“诱骗”受体TRAIL—R3(DcRl)和TRAIL．4(DcR2)。DcRl仅表达于正常细胞而不表达于肿瘤组织，DcR2仅表达于胎肝组织和成人睾丸组织，二者皆可竞争性地与TRAIL结合，避免或抑制TRAIL诱导的正常细胞损伤。还有一种受体是osteoprotegerin(OPG)，TRAIL与OPG结合可以不诱导细胞凋亡。因此，TRAI

8、L可选择性地诱导肿瘤细胞和转化细胞凋亡哺”，而对正常的组织和细胞不具有明显的毒性效应。TRAIL及其受体的发现为肿瘤的治疗提供了一个新的方向。1。虽然目前对TRAIL的抗肿瘤的研究已经取得了一些令人兴奋的结