抗隐孢子虫卵黄抗体（immunoglobulin+of+yolk，igy）的研究

《抗隐孢子虫卵黄抗体（immunoglobulin+of+yolk，igy）的研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、河南农业大学2006届硕十研究生毕业论文中文摘要本研究以饱和蔗糖溶液漂浮法收集剑河南同始鸡源隐孢子虫分离株，经鹌鹑传代纯化后，得到纯种卵囊，卵囊≯K卵圆形，测卵囊平均大小为6．5pmX4．7pm，卵囊形状指数1．31；在动物感染实验中，正常和免疫抑制情况下均不能感染小白鼠，但能成功感染雏鸡，出现明显的呼吸道症状及法氏囊病变，主要寄生在法氏囊、气管和泄殖腔等部位。根据卵囊形态学及寄生部位等特点，初步鉴定本实验分离虫种类为禽贝氏隐孢子虫(￡baileyi)。并研究了感染剂量和免疫抑制剂对雏鸡的排卵囊规律的影响，结果表明适量增人感染剂量，可使排卵囊

2、高峰期提前并延长，排卵囊强度增大，持续期也延长：使用免疫抑制剂可使高峰期提前，延长高峰持续期，排卵囊强度增大，但免疫抑制剂会造成试验动物死亡率增高，饮食明显减少，排粪量下降，，收集的卵囊量相应减少，不利于扩增隐孢子虫卵囊，且增加生产成本。利用上述经实验室扩增后的鸡源隐孢子虫卵囊，以改进的Sheather蔗糖梯度离心法提纯卵囊，低速离心结合滤膜微滤除菌后，通过反复冻融和超声波处理的全卵囊抗原，以福氏完全和非完全佐剂制各免疫抗原，改定四种免疫程序，免疫开产健康母鸡，选择最适免疫氍序，结果显示首免、二免剂量均为5×107个／只，免疫间隔6周，免疫次

3、数2次的第一组，每次免疫剂量均为l×10个／只，免疫间隔15～20天，免疫次数4次的第三组不能取得好的免疫效果，应用免疫抗原茸=梯度增加的免疫方法的第二组，取得了满意的抗体水平，一免、二免抗原量分别为1X107个／只，2×107个，只，三免、四免抗原量均为3×107个／只，五免、六免抗原量均为5xlO7个／只，每次免疫间隔15,-～20d，共免6次。第二组母鸡免疫后卵黄抗体逐渐上升，四免后15d升幅更为显著(ELISA效价1：20000)，在六免后15d，卵黄抗体水平达到1：144000，峰值区域(1：384000,-、,1：512000)持

4、续8周左右，6免后135d，卵黄抗体水平仍维持在1：144000；卵黄抗体的消长趋势与血清抗体的基本一致，但卵黄抗体水平明显高丁同期血清抗体水平。采用间接ELISA法和免疫荧光法对获得的卵黄抗体进行鉴定，获得IgY具有隐孢子虫属特异性。荧光法进行抗原位点定位，发现lgY抗体对卵囊的锐顶部和子孢子的识别明显强于卵囊的其他部位，这些位点存有更多的保护性抗原。以水稀释一盐析法纯化本次实验获得的IgY抗体，经SDS．PAGE分析后，提纯后的lgY抗体，主要有2条蛋白条带，即62KDa"---68KDa左右的重链，33KDa左右的轻链。IgY抗体在65

5、℃以下对活性无影响，70℃15min后活性．卜J降20％左右，75℃15min，活性下降了80％左右，80℃15min活性基本无活性。lgY在PH4～lO时活性无明显变化，PH<2或>11时活性明显下降，具有良好的耐酸碱性。应用体外动物感染治疗试验研究了抗隐孢子虫特异性卵黄抗体的治疗效果。结果表明：5河南农业大学2006届侦{j研究生毕业论文在试验中，三个不同治疗剂量的刚性lgY治疗组与感染对照组相比，OPG值(1×104个卵囊／克粪便)下降幅度为55----79％，卵囊转阴提前了5～lld。在不同治疗剂常上，大剂量治疗组(第三组：2000p

6、g／R．日)与中剂量治疗组(第四组：looottg／只．日)比较，OPG值下降36％，粪排卵囊转阴提前了3d，与小剂量治疗组(第五组：500嵋d只．日)比较，OPG值下降53％，粪排卵囊转阴提前了7d。表明特异性阳性IgY在实验动物人工感染治疗试验中显示良好的疗效，能显著减少鸡群OPG值，且lgY抗体剂量的大小与治疗效果成止比。临床症状观察结果显示阳性Igv的治疗能显著改善和缓解症状；病理切片观察治疗试验组与感染对照组比较，组织切片中的虫荷数明显下降，治疗组的料重比和存活率高于对照组。治疗剂量与疗效正相关。应用获得的IgY抗体，初步建立检测隐

7、孢子虫卵囊的间接免疫荧光检测方法，该方法具有良好的敏感性，IgY的最佳稀释T作浓度为1：4000--一l：8000，以3％的BSA稀释多抗能减少非特异性染色，能检测到的卵囊闽值为180～360个／mL样品，检测方法具有隐孢子虫属特异性。关键词：隐孢子虫；卵囊扩增；卵黄抗体：治疗；检测；应用6河南农业大学2006届硕士研究生毕业论义英文摘要ResearchofEggYolkAntibodiesAgainstCryptosporidumSupervisor：Prof．ZhangLongxian，Prof．NingChangshenMasterCa

8、ndidate：ShaoZhaoXiaABSTRACTCryptosporidiumoocystswereisolatedfromthefecesofGu—Shic