鹅卵黄抗体IgY的提纯及其酶标抗体的制备.pdf

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1、2015年第3期赵健：鹅卵黄抗体IgY的提纯及其酶标抗体的制备鹅卵黄抗体IgY的提纯及其酶标抗体的制备赵健，胡桂学，董浩，张双，邵洪泽，王开，赵艳丽(1．吉林农业大学动物科技学院，吉林长春1301182．吉林省畜牧兽医科学研究院，吉林长春130062)摘要：本试验采用辛酸去脂、饱和硫酸铵溶液盐析法提纯鹅卵黄抗体IgY，采用SDS—PAGE方法分析其纯度；用纯化后的IgY免疫试验兔，收集血清，测定血清抗体效价；采用辛酸一硫酸铵法结合ProteinG树脂亲和层析法纯化兔血清IgG，用改良的高碘酸钠法进行辣根过氧化物酶标记，直接ELI

2、SA法测定标记物效价。结果表明，提纯的鹅卵黄IgY浓度为11．5mg／mL，纯度约为92％；血清琼脂扩散抗体效价为1：32；WesternBlotting试验证明，兔血清中含有抗鹅卵黄抗体IY重链及轻链的特异性抗体；直接ELISA法测得标记物效价为1：1100。关键词：鹅；卵黄IgY；提纯：酶标抗体中图分类号：$852．4文献标识码：B文章编号：1672—9692(2015)03—0001—05ExtractionandpurificationofIgYfrOmgooseeggyolkandpreparationofrabbit

3、anti-gooseIgGlabeledbyHRPZhaoJian，HuGuiXue，DongHao，ZhangShuang，ShaoHongZe。，WangKai，ZhaoYanLi(1．CollegeofAnimalScienceandTechnologyofJilinAgriculturalUniversity，Ji1inChangchun1301182．AcademyofAnimalScienceandVeterinaryMedicineofJilinProvince，JilinChangchun130062)Abstr

4、act：ThiSexperimentadoptedthemethodofoctanoiCacidextraction，saturatedammoniumsulfatesolutiontosaltingoutandpurifygooseeggyolkantibodyIgYandanalyzeditspuritybysodiumsulphatepolyacrylamidegelelectrophoresiS．RabbitswereinoculatedwiththepurifiedIgYandseriawerecollected，th

5、eserumantibodytiterwasmeasured．ThecapryliCacid—ammoniumcom—binedwithProteinGresinaffinitychr0matographywereusedtopurifyIgG．ThepurifiedIgGwaslabeledwithHRPandthetiteroflabeledantibodywasmeasuredbydirectELISAmethod．There—sultsshowedthatthepurifiedgooseeggyolkIgYreached

6、theconcentrationof11．5mg／mLandpu—rityabout92％．Thetiteroftheantiserumwas1：32byagargelimmunodiffusiontest．Westernblot—tingtestindicatedthattherabbitserumcontainedanti—gooseeggyolkIgYwithheavychainand1ightchainofspecificantibody．ThepurifiedIgGwaslabeledwithHRPandthetite

7、roftheanti—bodymeasuredbydirectELISAmethodwas1：1100．KeyWOrdS：Goose：EggyolkIgY：Purification：HRP—Antibody酶标抗体是指抗体单体分子通过共价键与酶分抗体原位杂交反应及液相免疫吸附等试验方法，给子联结的产物，它既具备抗体的免疫特异性，又具抗原或抗体的检测提供了极大的方便，尤其是酶联有酶的高效催化性。酶标抗体的发明与应用派生了免疫吸附测定(Enzymelinkedimmunesorbentas一收稿日期：2015一O1—27作者简介：赵

8、健(1989一)，男，硕士研究生，主要从事动物病毒学研究。通讯作者：胡桂学(1963一)，男，教授，博士研究生导师，研究方向为动物病毒学。基金项目：吉林省现代农业产业技术体系建设专项资金(编号：201231)2现代畜牧兽医2015年第3期say，EIISA)方法