白藜芦醇对胃癌bgc823细胞中凋亡相关基因pdcd5表达影响的研究

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1、郑州大学2(X为届硕士研究生毕业论文白要芦醇对胃癌BGC-823细胞中凋亡相关荃因PDCDS表达影响的研究白蔡芦醇对胃癌BGC·823细胞中凋亡相关基因PDCDS表达影响的研究硕士研究生柴雅玫导师文小岗副教授陈奎生教授郑州大学基础医学院病理学教研室河南省肿瘤病理重点实验室河南郑州450052摘要背景和目的胃癌是消化系统中最常见的恶性肿瘤之一，目前胃癌己成为中国内地第三大常见肿瘤，严重威胁人民的健康和生命，是我国重点研究的恶性肿瘤之一。人程序化死亡分子5(thehumanprogranued。elldeaths，PnCDS)基因是

2、由北京大学人类疾病基因研究中心1999年在国际上首先报道的一个人类新基因，是从人白血病细胞株TF一1细胞中克隆到的凋亡相关新基因(GeneBank登记号AF014955)。PDCDS定位于19q12一q13.l，参与细胞凋亡过程的调控。PDCDS的mRNA在50余种人类组织中均有表达，并不限定于造血系统，其中在成年心、翠丸、’肾、’肾上腺及胎盘中高表达，其中胚胎组织表达明显低于成年组织，国内外己有多家实验室利用不同技术发现PDCDS在疾病情况下，特别是在肿瘤、自身免疫性疾病和局部损伤的情况下表达明显下降。白黎芦醇(r。Svera

3、trol，Res)是广泛存在于葡萄、虎杖、花生等药用植物中的一种多酚类化合物，作为低毒的天然药物，对消化、呼吸、血液、生殖等多个系统来源的肿瘤细胞有抑制作用，可显著抑制多种人类肿瘤细胞的生长、诱导肿瘤细胞凋亡。研究表明它可以通过抗氧化、抑制环氧化酶(COX)、抑制细胞色素P450酶、诱导肿瘤细胞分化和促进肿瘤细胞凋亡等来发挥抗癌作用。为探讨白黎芦醇对人胃低分化腺癌BGC一823细胞中PocDS蛋白和mRNA表达郑州大学2以拍届硕士研究生毕业论文白萦芦醉对胃癌BGC-823细胞中况亡相关基因PIX刃5表达形响的研究的影响以及白黎芦

4、醇对BGC一823细胞生长的抑制作用，本研究采用免疫细胞化学SP法检测PDCDS在BGC一823细胞中的蛋白表达;采用原位杂交技术检测BGC一823细胞中PDCDS在mRNA水平上的表达;采用流式细胞术和TUNEL法检测BGC一823细胞的增殖与凋亡。探讨PDCDS在BGC一823细胞中的表达与BGC一823细胞凋亡的相关性，为胃癌的临床治疗提供理论依据。材料和方法1.标本:人胃低分化腺癌细胞BGC一823购自中科院上海细胞生物学研究所，经复苏孵育，传代分为不同的实验组，分别用25腼o1/L、50阳ol/L、100枷01/L、2

5、00腼01/L的白黎芦醇处理BGC一823细胞24h、48h、72h。并设空白对照组(培养液对照组)，溶剂对照组(DMSO对照组)，顺铂组(3瑰/ml)，联合用药组(白黎芦醇200腼o1/L+)顷铂3瑰/m1)。2.应用免疫细胞化学SP法检测各组BGC一823细胞中PDCDS蛋白表达。3.应用原位杂交技术检测各组BGC一823细胞中PDCDSmRNA表达。4.应用流式细胞技术检测各组分别作用24h、48h、72h细胞的增殖分化情况。5.应用流式细胞技术检测各组分别作用24h、48h、72h细胞的凋亡情况。6.应用TUNEL法检测

6、各组作用24h细胞凋亡的情况。7.采用SPSSn.0软件进行统计分析。计量资料用均数士标准差(又士S)表示，两组均数的比较用t检验(t一test);两组以上均数的比较用方差分析(ANV以);以a二0.05为显著性检验标准。结果1.免疫细胞化学结果:PocDS蛋白在人胃低分化腺癌BGC一823细胞中低表达;以25腼01/L、50阳01/L、100阳01/L、200阳01/L4种不同浓度的白黎芦醇作用于BGC一823细胞24h、48h、72h后PocDS蛋白表达均较空白对照组有所升高;3个时间段内随着浓度增加，PDCDS蛋白表达增高

7、，且呈浓度依赖性，50一200阳ol/L白葬芦醇组与空白对照组及溶剂对照组相比，差异有统计学意义(只0.05)，各实验组之间两两相比，差异有统计学意义(只0.05):4个实验组中随着时间延长，PDCDS蛋白表达升高，差异无统计学意义(乃0.05);郑州大学2以为届硕士研究生毕业论文白葬芦醉对胃癌BGC一23细胞中凋亡相关荃因P以刃5表达形响的研究25阳ol/L白黎芦醇组、溶剂对照组与空白组相比差异无统计学意义(乃0.05)。3个时间段内实验组及顺铂组与联合组相比，差异有统计学意义(只0.05)，联合组中PDCDS蛋白的表达随着作

8、用时间的延长而升高，以作用72h升高最显著，三个时间段相比，差异有统计学意义(只0.05)。2.原位杂交结果:PocDSmRNA在人胃低分化腺癌BGC一823细胞中低表达;以25阳01/L、50阳01/L、100枷01/L、200枷01/L4种不同浓度的白黎芦醇