六种经济鱼类生长激素基因cdna克隆和原核表达

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1、摘要根据鲤形目和鲇形目生长激素(GroⅢhho肿one,011)基因N-末端和c一末端碱綦序列的绦守性设司—·对麓势弓}谚;麸藏垂薅中餐取惑R奠A,鬟释PeR方法扩增著壳隧嚣了大鳞副潍鳅(黜㈣扭gwmm幽6巧mⅫ)、泥鲰(A靠,g珊77醛檬俐溯豫”拗淞)、滕l善鱼(酾聊哆矽f"甜娜fdf缸螂)、鲇煎(&,耵姗舢of瓣)、黄河鼹(C:矽r砌拈c盘巾foinHuan曲eriver)和淇河鲫(e套㈣i辩&H瑚f淞法0谂。蛀ve疗S静羹鬟经济鱼类黢G珏藻函e黼A,劳详细分糖了筵序列特兹。彦别弱源瞧检索袭萌,颞尧隆豹cDNA片段为这6稃鱼酌G联蒸溜,蕊

2、G鹂8娃注册母分别为DQ350432、DQ350433、DQ350434、DQ350435、DQ350436和DQ350437。其中大鳞副溅皴帮艚脂鱼懿Gl{基因序列系第一次克隧。分幸厅其核潜蔽岸列和推测熬畿基酸枣舞,维栗擞示:本磺究露隆至l静站鱼照长激素基戮瓣开羧滔读程(0RF)包括603个孩营酸,编硒2∞个氨藻酸,其中包括22个懿基酸的信号肢和178个爨撼酸的成熟敝;其它五种焦魄ORF均为633幻,缡碣2lO个氨旗酸,其中包掭22个氨基酸灼信号肽秘188个氨基数懿戒熬簸;淀鳃帮大鳞黧漉蘸残熟默氨蒺疆痔疑的游深毪巍l∞%。这6个蛋文浚熬簸序

3、列和其它融知的鱼类GH都有较嵩的同源性,特涮是与相同露的惫类序列糯比,但与嵩等脊椎动物G王{的同源性较低。通过比对,在这些爨囱廖列内鉴定了许多保守的熬基酸残蒸,葵审熬大多羧蒙集悉戏5令绦守域。基予这6静惫类与其它惫类嚣高等脊穰动秘鹃赋{成熟肽氨基黢序列进行分予系统学分卡厅,结莱(MP树嗣M辩)与根据形态特缎嚣建的系统发育树基本~致。爰6葶串焦懿饕雾弓{物(主游弓

4、秘鸯霸入藏象{酶切镶点,下游萼

5、戆鞠入照旌酶韬霞纛)分掰扩增了大鳞黧淀鳅、站籀、瘸艏惫、黄湃簿和淇湾鳎豹G}{成熟救,褥其瓮肉播入到融台表达载体pEl二28a质粮中,转化大脑杆菌BL

6、21(DE3),用质粒PcR方法筛选阳性克隆,震藏蟊l移髂Dl薅落鍪定嚣娥矮粒。以{玎G诱导融合装囊表达,SDS—P&G藏分耩表露蕤导重缰度粒寝运了融合鬓自,主要为不滚髓的包含髂,鲢鱼分子鬃约为22。5鼢,其它4静约为23.5kD,与实验预期的分子量一致。5种融合蛋囱表达量均超过礞自总量的50%。融台蛋螽N.末麓謦毒缀氨酸撂签,粟薅爨定纯金鼹配霉攀亲帮鬟辑,获褥电泳缝懿薰缀蛋鑫。奉疆究巍陵到了8瓣煎熬GH基阁c脒A枣剜,并成功梅建了原核表达栽休,实凌了5种熏组Gl{蛋白的高效表达,为进一步开展其应鲻和生物活性检测分析及研制新型鱼类生长促进剡夔

7、定了基础。关键稍:泥鳅,大鳞剐泥鳅,鲇鱼,胭脂鱼,黄河鳃,淇河鲫,生长激豢,序列分析原棱表达{AbstractApairofconsensllsdegenerateprimerswasdesignedbasingonNternlinalandC-tenninalconservativeaminoacid(嘲ofgro、vthhomlone(G娜inCyprinifo彻esandSilurifonnesfishes.Using勰零eR㈧晒d,潮eDNAswe瑶黝pl主鑫ed艄疆el。ned辆瑚to缓RNAis。1a燃橛Bpitui协ryg】an

8、dofsiximponanteconom{cnshes,Pd黼H姆母w驸妇幻伽蚶,倒文塔“M淞戮豁疆ic癌娃矗8l就s,麓蕊ecy矽{勰s窳鑫娃li积s,黼榭镑s8s。l栏嚣,q秽i狂黼c掰plo诹掩砼避聚如程蕊C囊郴螽捧群甜镍如描inQ热e蠢ve£Seq黼ncecom辫risonw确tkcxi嘏硅gG疆g鞠eeon嚣黼ed也a主畦瓣∞e丑心A蠡毓g瓣emswe瓣G疆露enesof畦拉鲢x蠡囊es.硅e鑫ece巅。珏珏髓l酶耩遮(b媾彝呔afeDQ350432,DQ350433,DQ350434,DQ350435,DQ350436andDQ3

9、50437respectiVely.Itisthe薮rst蛀me协clonet歉eGHseq毡eBeesof执l黻辫i踞槲;瓣幽妇y测琳a聪蜘母罗抽粥掰酗爵积曼T糯0penreading矗afne(oRF)of辩Z“r淞础of蝴GHcontains603bpwhichencodesaprocursorof200aacol砷risinga22勰si辨alpeptideanda178aam熊撇辫口t融,Eachof搬eatherseq蜮lcesincludes躲O鼯。。f633bpwhiehenc藤es箍prec搬sorof210姐e跚峄蠡bga

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