罗格列酮对环孢素a所致大鼠肾小管上皮细胞凋亡的影响

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1、郑州人学2009届硕士毕业论文(中文摘要)罗格列酮对环抱素A所致大鼠肾小管_l二皮细胞凋亡的影响罗格列酮对环抱素A所致大鼠肾小管上皮细胞凋亡的影响硕士研究生石新慧导师李红刘章锁郑州大学第一附属医院肾病内科河南郑州450052摘要〔背景和目的〕环抱素A(CyclosporineA，csA)是器官移植后免疫抑制、抗排斥反应以及多种免疫性疾病治疗的一线药物，其临床应用显著改善了实体器官移植的近期存活率，但CsA的应用会导致肾脏毒性，成为限制其临床应用的主要原因，主要病理特征为肾小管上皮细胞的凋亡和坏死，以及不可逆的肾间质纤维化。既往研究发现肾素一血管紧张素系统(Renin一giotensinS

2、ystem，RAS)的激活、转化生长因子-pl(TransformingGrowthFactor一bctal，TGF一pl)、一氧化氮以及过氧化物酶体增殖物受体斗(PeroxisomeProliferator一AetivatedReeeptor-丫，ppAR丫)的激活等因素可能参与了CsA肾毒性的发生发展过程，近来研究发现凋亡在CsA肾毒性的发生机制中具有重要作用。过氧化物酶体增殖因子活化受体(peroxisomeproliferator-aetivated:eeeptors，PPARs)是一类由配体激活的转录因子，属H型核激素受体超家族成员。已肯定的有三种亚型:a、p、Y，该类受体具有

3、组织分布和配体特异性，PPARs在控制炎症反应、脂质代谢，细胞增生和分化等方面发挥重要作用，近来有研究报道PPARY可参与细胞凋亡的调节。罗格列酮(rosiglitazone，ROZ)属曝吟烷二酮类(thiazolidinediones，TzDs)胰岛素增敏剂，是过氧化物酶体增殖物激活受体一:(PPARY)的合成配基，与PPARY结合后可激活许多基因的转录，因此，具有多种郑州大学2009届硕士毕业论文(中文摘要)罗格列酮对环抱素A所致大鼠肾小管1皮细胞凋亡的影响生物学效用。现已有报道罗格列酮在防治CsA导致的肾器质性病变中具有保护作用。本研究用大鼠肾小管上皮细胞(NRK一52E)，经体外

4、培养实验法，观察csA对NRK一52E细胞凋亡的影响，并初步探讨罗格列酮对CsA致NRK一52E细胞凋亡的拮抗作用。〔方法〕l，分组:常规方法体外培养NRK一52E细胞，用含10%胎牛血清的DMEM培养液将细胞培养于37℃、5%COZ的恒温培养箱，正常培养的NRK一52E细胞分为七组:(z)正常对照组;(2)esA损伤组(0.2拌留L):(3)esA损伤组(2.0林岁L);(4)CsA损伤组(20林留L);(5)罗格列酮干预组(CsAZo林g/L+ROzs林mol/L);(6)罗格列酮干预组(CsA20”岁L十Rozlo林mol/L);(7)罗格列酮干预组(CsAZO拜岁L+ROZ15”

5、mol几)。细胞融合率达40%一50%时用血清饥饿法同步化24h，然后按上述分组加药处理，继续培养达24h时用以下方法进行研究。2.利用倒置显微镜观察加药24h时细胞形态学的变化。3.采用AnnexinV一FITc/PI双染流式细胞仪检测加药24h时上述各组细胞的凋亡率。4.蛋白印迹分析(westem一blotting)检测加药24h时各组细胞Bel一2、Bax及CasPase一3蛋白的表达情况。〔结果〕1.细胞的形态变化:细胞经CsA处理24h时，在倒置显微镜下观察发现对照组细胞贴壁生长良好，呈铺路石样，边界清楚，可见较多核分裂相;与对照组细胞相比，随着CsA浓度的增加，细胞损伤程度及

6、数量明显增加。CsAO.2”留L组有极少量细胞在24h后出现了空泡化、回缩、变圆、与周围细胞脱离，CsAZ”岁L及20林留L组贴壁细胞结构不完整，可见较多细胞发亮变圆，由于细胞脱落增多导致贴壁细胞密度明显变稀，给予ROZ干预后，各组细胞损伤情况均有所改善，与CsA损伤组相比有显著性差异。2.细胞凋亡率:24h时流式细胞仪显示对照组细胞凋亡率平均值为5.06%，而CsA损伤组则呈剂量依赖性地诱导NRK细胞发生凋亡，凋亡率分别升至郑州大学2009届硕士毕业论文(中文摘要)罗格列酮对环抱素A所致大鼠肾小管卜皮细胞凋亡的影响一1.45%、20.060，0、25.910，0，与对照组相比明显增加(

7、六o.ox);孵育24h后罗格列酮干预组均可下调csA(20抖留L)诱导的NRK细胞的凋亡率，凋亡率分别降至27.32%、2一32%和一5.55%，以Rozlo林molzL组及一5林mol/L组最为显著(尸<0.01)。3.Bax:与对照组相比，CsA呈剂量依赖性地促进Bax蛋白的表达(P<0.ol)，Bax蛋白平均灰度值从对照组的0.088士0.013分别升至0，307士0.010、0.415士0.011和0.614土0.013，