罗格列酮对高糖环境中大鼠肾小管上皮细胞的保护性分析

《罗格列酮对高糖环境中大鼠肾小管上皮细胞的保护性分析》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、郑州大学2005届硕士研究生论文罗格列酮对高糖环境中大鼠肾小管上皮细胞的保护性研究罗格列酮对高糖环境中大鼠肾小管上皮细胞的保护性研究研究生：李海剑导师：刘章锁郑州大学第一附属医院肾病内科郑州450052引言糖尿病是继心血管病、肿瘤之后第三位威胁人类健康的疾病，由于生活水平提高，高热量饮食增多，活动减少，人口老化和诊疗技术的进步，糖尿病发病率在不断上升。糖尿病肾病(diabeticncphropathy,DN)是常见的糖尿病慢性微血管并发症，是导致慢性肾功能不全的常见原因之一。在终末期肾病病人中约三分之一是由DN

2、引起的，给人类带来极大危害。这个问题促使人们不断寻求有效药物和手段控制糖尿病及糖尿病肾病的发展。对糖尿病肾病的研究多年来～直聚焦于肾小球，而占据整个肾脏体积几乎达90％的肾小管间质却未得到应有的重视。近年来，随着对肾小管问质病变在肾脏疾病进展与预后中作用的研究，发现肾小管上皮细胞在糖尿病肾病的发生发展中有着不可忽视的作用。糖尿病状态下，由于尿糖的产生及间质组织、肾小管周围血管葡萄糖浓度升高，近端小管细胞的顶端侧及基底侧均始终处于高糖环境中。有研究报道，受高糖影响近端肾小管上皮细胞Ⅳ型胶原(ColIV)、纤维连结

3、蛋白(F'D基因与蛋白水平升高，与此同时转化生长因子13l(TGF_131)基因水平、蛋白表达及活性上调11'2】。这些变化，现被认为正是启动和促进小管间质组织纤维化进程的关键因素，并且该致病作用可能并不完全依赖于肾小球病变，而是导致糖尿病肾病的独立因素之一。过氧化物酶体增殖物激活受体(peroxisomeproliferatorsactivatedreceptors．郑州大学2005届硕士研究生论文罗格列酮对高糖环境中大鼠肾小管上皮细胞的保护性研究PPARsl，是在1990年发现的一种新的甾体激素受体【3】，

4、它能被一类脂肪酸样化合物过氧化物酶体增殖物激活，因而被命名为过氧化物酶体增殖物激活受体14】。罗格列酮(Rosiglitazone，RGZ)是近年应用于临床的一种噻唑烷二酮类(TZDs)胰岛素增敏剂，是核转录因子过氧化物酶体增殖物激活受体Y(PPA研)的配基，可以调控脂肪细胞分化和机体的葡萄糖平衡，目前临床上主要作为口服降糖药治疗2型糖尿病。TZDs与PPARy结合后，诱导核受体发生结构改变将其激活，进而与视黄酸受体X(RXR)或糖皮质激素受体形成异二聚体，再结合于靶基因的特异性DNA序列而使靶基因活化，此序列

5、称为过氧化物酶体增殖物反应元件(peroxisomeproliferatorsresponsiveelement，PPRE)。靶基因的转录激活导致蛋白合成和生物化学效应。由于发现PPARy与脂肪细胞的分化、糖尿病、肥胖、胰岛素抵抗、动脉粥样硬化形成、抗增生、抗肿瘤及抗炎症等反应关系密切{研，PPART成为近年来的研究热点，一系列研究表明，除了改善机体胰岛素抵抗等代谢调节作用外，PPARy配体1’zDS还具有抗炎、影响细胞增殖和转分化、抗脏器纤维化等作用16书】。这些作用与肾脏疾病有着密切的联系。但TZDs对高糖

6、环境中肾小管细胞直接作用的相关研究国内外未见报道，为此，本实验以体外培养的大鼠肾小管上皮细胞(NRK52E)为对象，给予高糖刺激，观察PPARy、转化生长因子131(TGF—B1)、n一平滑肌肌动蛋白(Q—ShIA)和纤溶酶原激活物抑制因子一1(PAl．1)的表达以及罗格列酮的干预作用，进一步探讨TZDs对糖尿病肾病的保护作用及其机制。2郑州大学2005届硕士研究生论文罗格列酮对高糖环境中大鼠肾小管上皮细胞的保护性研究材料与方法1实验材料1．1细胞：大鼠肾小管上皮细胞(NRK52E)购自四川大学医学院生化实验室

7、。1．2试剂：罗格列酮原粉北京大学医学部管又飞博士馈赠四甲基偶氮唑盐(MTr)Sigma公司二甲基弧砜(DMSO)Sigma公司逆转录酶Fermentas公司TRIzol试剂hvitrogcn公司TaqDNAPolymeraseTaKaRa公司标准胎牛血清GibcoBRL公司DMEM低糖培养基GibcoBRL公司DMEM高糖培养基GibcoBRL公司琼脂糖Biobasiclnc．公司DNAmarker(DL3000)BiobasicInc．公司兔PPARY多克隆抗体SantaCruz公司兔TGF-01多克隆抗体

8、SantaCruz公司山羊。一SMA单克隆抗体SantaCruz公司DAB试剂盒北京中杉生物公司1．3主要仪器：超低温冰箱凝胶图象分析系统常温低速离心机低温超速离心机漩涡混合器微量振荡器3美国Forma公司美国Stratagene公司上海安亭科学仪器厂美国Beckman公司江苏海门医用仪器厂江苏金坛医用仪器厂郑州大学2005届硕士研究生论文罗格列酮对高糖环境中大鼠肾小管上皮细胞的保护性