pdtc抗冠状动脉内皮细胞缺氧再给氧损伤实验的研究

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1、＼10118．；3鲎刿匡生瞳亟±茔焦迨圭CAECGSH腿ICAM—lI／RMDAMIRjNF—kBPCAECPDTCROS缩略词表coronaryarteriesendothelialcell冠状动脉内皮细胞glutathionehypoxiaJreoxygenation谷胱甘肽缺氧／再给氧intercellularadhesionmolecule．1细胞间黏附分子一1ischemia／reperfusionmalonaldehy’de缺血／再灌注丙二醛myocardialischemicreperf

2、usioninjury心肌缺血再灌注损伤nuclearfactorkappa·B核转录因子porinecoronaryarteriesendothelialcell猪冠状动脉内皮细胞pyrrolidinedithiocarbamate吡咯烷二硫氨基甲酸酯reactiveoxygenspecies活性氧盆型匿生隆塑±鲎焦堡圭PDTC抗冠状动脉内皮细胞缺氧再给氧损伤的实验研究研究生江小萍导师夏勇教授李东野教授陈清枝教授中文摘要目的体外培养猪冠状动脉内皮细胞(porinecoronaryarteriesen

3、dothelialcell，PCAEC)，建立缺氧再给氧(hypoxia／reoxygenation，H／R)模型，观察H／R及抗氧化剂吡咯烷二硫氨基甲酸脂(Pyrrolidinedithiocarbamate，PDTC)对PCAEC形态及丙二醛(malonaldehyde，MDA)、谷胱甘肽(glutathione，GSH)等含量的影响，观察HfR及PDTC对PCAEC核因子一KBP65(nuclearfactorkappa-B，NF．KBP65)活性及细胞间黏附分子一1(intercellular

4、adhesionmolecule一1，ICAM一1)表达的影响，观察H／R及PDTC对PCAEC细胞活力、细胞凋亡率的影响，探讨PCAEC缺氧再给氧损伤的发生机制及PDTC对该病理生理过程的影响。方法1取猪冠状动脉，分离脂肪及结缔组织，采用酶消化法分离细胞作原代培养，倒置相差显微镜观察细胞形态及DiI—Ac．LDL染色鉴定细胞。取第3．5代PCAEc用于实验。2将PCAECs分为三组，对照组：未经处理。H／R组：将细胞放置低氧环境(95％N2，5％C02)37。C培养2h，再恢复正常环境(21％02，

5、74％N2，5％C02)37。C培养。PDTC组：以100umol／L的PDTC与PCAEC共同孵育1h，再制作H／R模型。3倒置相差显微镜观察各组PCAEC形态学变化；应用二硫代硝基苯甲酸比色法2盆型匡生堕塑圭茔焦缝塞及硫代巴比妥酸比色法分别测定PCAEC缺氧2h、再给氧3h时MDA及GSH等物质含量；应用免疫细胞化学方法测定各组细胞缺氧2h、再给氧3h、再给氧15h时NF—KBP65及ICAM．1的表达；MTT比色法检测缺氧2h、再给氧3h时PCAEC活性；流式细胞术检测缺氧2h、再给氧3h时细胞

6、凋亡率。结果1倒置相差显微镜下PCAEC单层贴壁生长，呈典型的铺路石样结构，细胞间连接紧密；DiI．Ac—LDL染色，在荧光显微镜下显示特征性的黄绿色荧光，细胞纯度大于98％。2细胞形态观察对照组PCAEC呈单层铺路石样生长，细胞间连接紧密，在两个时间点细胞形态无明显改变。H／R组缺氧2h，部分细胞变圆收缩，细胞间隙增宽；再给氧3h大部分细胞变圆收缩，细胞间隙明显增宽，部分细胞脱落。PDTC组缺氧2h，大部分细胞贴壁生长，但细胞间隙较宽，少部分细胞交圆收缩；再给氧3h较缺氧2h细胞形态无明显改变，但个

7、别细胞脱落。提示：缺氧改变PCAEC的正常形态，再给氧可使细胞更严重的变形，甚至使细胞脱落、死亡；PDTC可减轻上述改变。3MDA及GSH的含量缺氧2h和再给氧3h时H／R组及PDTC组MDA含量较对照组同期明显升高(P0．1)。缺氧2h和再给氧3h时H／R组及PDTC组GSH含量明显低于对照组同期(P

8、．05)，其中PDTC组明显高于H／R组同期(PO．1)。提示：缺氧使PCAEC的氧自由基清除功能减退，再给氧进一步加重此种损害；PDTC可减轻缺氧再给氧引起的损害。4NF．KBP65及ICAM．1的表达在三个时间点，对照组中NF．KBP65有一定堡型匿主堕墅圭茔焦造圭一程度的表达；H／R组及PDTC组NF—KB