中药香加皮乙酸乙酯提取物抗肿瘤与免疫调节作用的研究

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1、英文缩写CPEAEDMSOEBFCSPIRPMIEDTAFCMHCPTICsoMTTODPBSSDSTrisConACIrpmIRAPSTEMEDEnglishAbbreviationEthylAcetateExtractFromCortexPeriplocaeDimethylSulfoxideethidiumbromide溴化乙啶fetalcalfserum胎牛血清proliferationindex增殖指数RoswellParkMemorialInstitutue乙二胺四乙酸钠flowcytometry流式细胞术羟基喜树碱inhibitoryconcentrationgiv

2、ing50％inhibition3一(4，5一dimethy-2-thiazloy)一2，5-diphenyl·-2·-te—-trazoliumbromideopticaldensityphosphatebuffersolutionsodiumdodecylsulfate三羟甲基氨基甲烷ConcanavalinAcytotoxicindexrotationperminuteinhibitoryrate过硫酸胺四甲基乙二铵6河北医科大学学位论文使用授权及知识产权归属承诺本学位论文在导师(或指导小组)的指导下，由本人独立完成。本学位论文研究所获的研究成果，其知识产权归河北医科大学

3、所有。河北医科大学有权对本学位论文进行交流、公开和使用。凡发表与学位论文主要内容相关的论文，第一署名单位为河北医科大学，试验材料、原始数据、申报的专利等知识产权均归河北医科大学所有。否则，承担相应的法律责任。研究生签名．苘卤峰师院领导签名：研究生学位论文独创性声明日本论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果，除了文中特别加以标注和致谢等内容外，文中不包含其他人已经发表或撰写的研究成果，指导教师对此进行了审定。本论文由本人独立撰写，文责自负。研⋯名：焉晓哗新呜n乡日中文摘要中药香加皮乙酸乙酯提取物抗肿瘤及免疫调节作用的研究摘要目的：研究中药香加皮提取物的体外抗肿瘤作用和免

4、疫调节作用，分离纯化香加皮提取物的抗肿瘤活性成分，主要研究中药香加皮乙酸乙酯提取物(CPEAE)对人源性食管癌细胞株and,鼠脾细胞生长的作用，探讨其诱导细胞凋亡、细胞周期阻滞和提高免疫调节力的机制，为抗肿瘤新药的开发、研制提供科学依据。方法：1．应用MTT法分析不同浓度的CPEAE对两种人源性食管癌细胞TE．13和Eca．109增殖的抑制作用；2．应用Gimsa染色法分析TE．13用药前后的细胞形态变化；3．应用流式细胞技术检测用药前后TE．13细胞周期分布和凋亡率的变化；4．应用琼脂糖凝胶电泳检测用药前后TE一13细胞DNA凋亡片段长度和数量的变化；5．应用Westernb

5、lot方法检测TE．13细胞经药物处理前后细胞周期蛋白依赖性激酶CDK4、CDK2蛋白表达水平的变化。6．采用MTT法检测CPEAE对小鼠脾细胞、小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能、细胞因子分泌功能等的影响。结果：1．CPEAE对TE一13和Eca．109两种细胞的增殖具有明显的抑制作用(P

6、胞凋亡形态学变化，有的出现核固缩，核碎裂以及凋亡小体在盘寸O3．经流式细胞学分析的DNA直方图上可见CPEAE作用后，TE．13细胞在Gl峰前出现细胞凋亡峰亚G1期峰，且G0／G1期细胞增多(P<0．01)，S期期细胞明显减少(PO．05)。25ug／ml的CPEAE作用48h后，TE．13的细胞凋亡率高达49．2％，未处理组细胞凋亡率为4．18％；4．琼脂糖凝胶电泳结果显示，经25u∥ml和12．5u∥ml的CPEAE处理48小时后，TE．13细胞DNA降解成寡聚核小体，出现明显的有规律的梯形条带。5．Westernblot结果显

7、示CPEAE能降低TE．13细胞CDK4蛋白的表达(PO．05)。6．CPEAE作用后，小鼠的脾的淋巴细胞的增殖有促进作用(P<0．01)，巨噬细胞对肿瘤细胞的吞噬作用明显增强(P